南、北美大豆猝死綜合癥病菌PCR檢測(cè)方法的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、對(duì)南美大豆猝死綜合癥病菌Fusarium tucumaniae和北美大豆猝死綜合癥病菌Fusarium viRguliforme rDNA基因間間隔區(qū)(IGS)進(jìn)行分析后設(shè)計(jì)篩選出三對(duì)特異性引物FT1/FT6、FT1/FT9和FV1/FV1A。利用FT1/FT6、FT1/FT9兩對(duì)特異性引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，南美大豆猝死綜合癥病菌能分別擴(kuò)增出250bp、656bp左右的特異性PCR產(chǎn)物，利用特異性引物FV1/FV1A進(jìn)行PCR反應(yīng)，北美大

2、豆猝死綜合癥病菌能擴(kuò)增出228bp左右的特異性PCR產(chǎn)物，使用的菌株包括5株Fusarium virguliforme,3株只tucumaMac，1椿Fusaritium brasiliense,1株 Fusarium cuneirostrum．1椿 Fusariumphaseoli，6株P(guān)hytophthora sojae和21株從大豆或土壤中分離的Fusarium sp。利用Alu I和Sac I內(nèi)切酶對(duì)特異性引物FT1/FT6形成

3、的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切試驗(yàn)，特異性PCR產(chǎn)物分別被切成232bp、18bp和158bp、92bp兩段產(chǎn)物；用AluI內(nèi)切酶對(duì)特異性引物FV1/FV1A形成的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切試驗(yàn)，特異性PCR產(chǎn)物分別被切成144bp、84bp兩段產(chǎn)物，均與設(shè)計(jì)酶切序列相吻合。靈敏性試驗(yàn)表明：利用特異性引物FT1/FT6、FV1/FV1A檢測(cè)到南、北美大豆猝死綜合癥病菌DNA的最低含量均為lpg/ul。土壤檢測(cè)試驗(yàn)表明，利用FT1/FT6特異性引物和另一對(duì)

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