RRM1和RRM2表達(dá)水平與宮頸癌化療的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：核糖核苷酸還原酶(Ribonucleotide reductase，RR)是細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制和損傷修復(fù)中的限速酶，在細(xì)胞增殖以及腫瘤增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起著重要作用。宮頸癌在女性高發(fā)惡性腫瘤中位于第二位，化療是宮頸癌治療的一種重要手段。RR是一些抗腫瘤藥物的作用靶點(diǎn)，吉西他濱（Gemcitabine，GEM）是目前最有效且應(yīng)用最廣泛的RR抑制劑。本研究通過(guò)檢測(cè)宮頸癌組織和細(xì)胞中 RR酶活性及亞基表達(dá)水平，探討 RR在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的

2、可能作用；進(jìn)一步研究吉西他濱與卡鉑(Carboplatin, CBDCA)聯(lián)合用藥對(duì)宮頸癌細(xì)胞的作用效果。
　　方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)、Western Blotting和CDP還原法分別檢測(cè)宮頸癌組織及癌旁正常組織中 RR亞基表達(dá)及酶活性，CCK-8法檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞系 SiHa、CaSki對(duì)GEM、CBDCA單藥及合藥的敏感性，EdU法檢測(cè)GEM對(duì)宮頸癌細(xì)胞DNA合成的影響，Western Blotting

3、和免疫熒光兩種方法檢測(cè)藥物對(duì)宮頸癌細(xì)胞的DNA損傷作用，流式細(xì)胞儀檢測(cè)GEM、CBDCA單藥及合藥時(shí)細(xì)胞凋亡情況，并基于Chou-Talalay法計(jì)算合用指數(shù)（CI）以分析GEM與CBDCA合用對(duì)宮頸癌細(xì)胞是否具有協(xié)同作用。
　　結(jié)果：宮頸癌組織中的RRM1和RRM2 mRNA水平較癌旁正常組織中的表達(dá)水平明顯升高(P<0.0001)，類似地，RR酶活和亞基蛋白表達(dá)水平在宮頸癌組織中的水平也上調(diào)。GEM能抑制宮頸癌細(xì)胞DNA合成，

4、CBDCA能誘導(dǎo)DNA損傷，GEM與CBDCA聯(lián)合作用對(duì)宮頸癌細(xì)胞具有協(xié)同毒性作用(log10[CI]<0)，GEM與CBDCA合用能促進(jìn)誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞DNA損傷產(chǎn)生和促進(jìn)細(xì)胞凋亡率增加。
　　結(jié)論：核糖核苷酸還原酶在宮頸癌中的表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明RR抑制劑GEM與宮頸癌一線化療藥物 CBDCA合用對(duì)宮頸癌細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同毒性作用，協(xié)同作用是通過(guò)抑制DNA合成和促進(jìn)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的。本研究可能為GEM聯(lián)合CBDCA在宮頸癌的臨床治療應(yīng)