hENT-1，DCK，RRM1和RRM2的表達(dá)與胰腺癌吉西他濱輔助化療敏感性研究.pdf

1、目的:
　　近年來胰腺癌的發(fā)病率在國內(nèi)外均呈明顯上升趨勢，且預(yù)后極差，其五年生存率低于5％。即使術(shù)后輔助化療的病人，5年生存期仍只有10％～30％。以吉西他濱為主的化療方案是胰腺癌化療的標(biāo)準(zhǔn)方案。而吉西他濱耐藥仍然是延長患者總生存期(overall survival，OS)和無病生存期(disease free survival，DFS)的重要阻礙。因此，預(yù)測胰腺癌術(shù)后患者的化療耐藥性，從而選擇最佳的化療方案，實現(xiàn)更好的個體化治療

2、，對提高胰腺癌患者的生存具有重大意義。
　　吉西他濱是一種很強的親水性藥物，不能以被動擴散的方式穿過細(xì)胞膜，而主要通過人平衡型核苷轉(zhuǎn)運體1(human equilibrative nucleoside transporter-1，hENT-1)進(jìn)入胞漿。在胞漿中，吉西他濱在被脫氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase，DCK)磷酸化成雙氟脫氧胞苷一磷酸(difluorodeoxycytdine monophosphat

3、e，dFdCMP)，隨后，DCK將dFdCMP轉(zhuǎn)換成其活性代謝物，即雙氟脫氧胞苷二磷酸（difluorodeoxycytidine diphosphate, dFdCDP）及雙氟脫氧胞苷三磷酸(difluorodeoxycytidine triphosphate，dFdCTP)。dFdCDP和dFdCTP通過抑制核苷酸還原酶（ribonucleotide reductase，RR）來阻礙三磷酸脫氧核苷酸(deoxynucleotide

4、triphosphates)的生成，而三磷酸脫氧核苷酸是合成DNA的必需材料。RR由其大亞基核苷酸還原酶M1(ribonucleoside reductase subunitM1，RRM1)和小亞基核苷酸還原酶M2(ribonucleoside reductase subunit M2，RRM2)組成。
　　近年來，國外關(guān)于吉西他濱敏感性的研究逐漸增多，hENT-1，DCK，RRM1和RRM2等幾種吉西他濱代謝相關(guān)的基因也各有報道

5、，但關(guān)于這幾種基因能否預(yù)測胰腺癌患者吉西他濱輔助化療的敏感性，結(jié)論尚有爭議，不能對臨床產(chǎn)生較大的指導(dǎo)意義。并且到目前為止，還沒有關(guān)于中國胰腺癌人群的大宗報道。
　　本課題擬回顧性分析我院2005.1月到2011.6月期間收治的胰腺癌術(shù)后患者，其hENT-1，DCK，RRM1和RRM2表達(dá)與吉西他濱輔助化療敏感性的關(guān)系，為其應(yīng)用于臨床提供證據(jù)。
　　方法:
　　一、病人的篩選及病例資料的收集和總結(jié)
　　我們收集了從

6、2005.1月到2011.6月我院收治的所有病理確診為胰腺導(dǎo)管腺癌的行腫瘤切除術(shù)病人的臨床資料。剔除接受新輔助化療、放化療、非吉西他濱化療、R2切除的病人及術(shù)后1月內(nèi)死亡、隨訪信息不全的病例，共篩選出102例病人，其中45例術(shù)后未行化療，為非化療組（對照組），57例術(shù)后行至少3個周期的吉西他濱或GEMOX(吉西他濱+奧沙利鉑)方案的化療，為化療組（實驗組）。兩組性別，年齡，手術(shù)方式，Rx(R0或R1)切除，臨床分期，病理分級，腫瘤大小等

7、臨床指標(biāo)相匹配，無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。設(shè)立對照組，以期排除hENT-1，DCK，RRM1，RRM2基因的表達(dá)本身即為胰腺癌術(shù)后患者的獨立預(yù)后因素的可能，進(jìn)而證明其僅在吉西他濱輔助化療的患者中發(fā)揮作用。
　　二:免疫組化及結(jié)果評級
　　我們收集了此102例病人的福爾馬林固定石蠟包埋的腫瘤組織蠟塊，HE染色的切片用來確認(rèn)病理類型為胰腺導(dǎo)管腺癌。組織蠟塊切成小于4um厚度的連續(xù)切片，做hENT-1，DCK，RRM1，RRM

8、2的蛋白免疫組化。并由本人與本院病理科程潤芬醫(yī)生分別評級。結(jié)合雙方的組化評級結(jié)果，評分不一致的請本院病理科孫燕副主任醫(yī)師評定。
　　三:QRT-PCR及結(jié)果計算
　　102例胰腺癌病人中可收集到53例病人的新鮮冰凍腫瘤組織，其中化療組24人，非化療組29人。兩組性別，年齡，手術(shù)方式，Rx(R0或R1)切除，臨床分期，病理分級，腫瘤大小等臨床指標(biāo)相匹配，無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。我們采用RNA提取試劑盒從這53例病人的新鮮

9、冰凍腫瘤組織中提取全RNA，反轉(zhuǎn)錄并用QRT-PCR驗證hENT-1，DCK，RRM1，RRM2在mRNA水平表達(dá)與吉西他濱化療敏感性的關(guān)系。
　　四:結(jié)果分析
　　在化療組和非化療組中分別分析hENT-1，DCK，RRM1，RRM2四個基因在蛋白組化水平及mRNA水平與患者OS和DFS的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　一:蛋白水平
　　1.患者總生存期(OS)分析
　　非化療組中，RRM1蛋白表達(dá)為患者OS

10、的獨立相關(guān)因素。RRM1蛋白高表達(dá)組生存期較高，這與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致?；熃M中，RRM2，hENT-1的蛋白表達(dá)是患者OS的獨立相關(guān)因素。RRM2低表達(dá)組、hENT-1高表達(dá)組分別擁有較長的OS。
　　2.患者無瘤生存期(DFS)分析
　　非化療組中，RRM1的蛋白表達(dá)為患者DFS的獨立相關(guān)因素。RRM1蛋白高表達(dá)組的患者DFS較長?；熃M中，RRM2，hENT-1的蛋白表達(dá)為患者DFS的獨立相關(guān)因素。RRM2低表達(dá)組、hE

11、NT-1高表達(dá)組分別擁有較長的DFS。
　　二:mRNA水平
　　1.患者總生存期(OS)分析
　　兩組中，hENT-1，DCK，RRM1，RRM2的mRNA表達(dá)均非患者OS的獨立相關(guān)因素?；熃M中，hENT-1 mRNA高表達(dá)組的生存期較長，但達(dá)不到統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.091)。
　　2.患者無瘤生存期(DFS)分析
　　非化療組中，hENT-1，DCK，RRM1，RRM2的mRNA表達(dá)均非患者DFS的獨

12、立相關(guān)因素?；熃M中，hENT-1 mRNA的表達(dá)為患者DFS的獨立相關(guān)因素。
　　結(jié)論:
　　RRM2，hENT-1的蛋白水平的表達(dá)是吉西他濱輔助化療患者DFS和OS的獨立相關(guān)因素，RRM2低表達(dá)組、hENT-1高表達(dá)組分別擁有較長的DFS和OS。在mRNA水平，僅hENT-1為吉西他濱輔助化療患者DFS的獨立相關(guān)因素。RRM2，hENT-1免疫組化染色的方法，操作簡單，靈敏度高，重復(fù)性強，有望成為預(yù)測胰腺癌患者術(shù)后吉西他