左旋咪唑和共刺激分子作為佐劑用于病毒性乙型肝炎治療性疫苗的研究.pdf

1、乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV，hepatitis B virus)引起的一種影響人類健康的重要傳染病。乙肝疫苗的接種是目前控制乙型肝炎感染的最有效的措施，但是傳統(tǒng)的乙型肝炎亞單位疫苗是由乙型肝炎病毒的表面抗原和鋁佐劑組成，鋁佐劑決定了該疫苗僅能引起很好的體液免疫而不能產(chǎn)生有效的細(xì)胞免疫，因此傳統(tǒng)的乙型肝炎亞單位疫苗僅激活體液免疫反應(yīng)，沒有能力激活細(xì)胞免疫。所以，乙型肝炎亞單位疫苗僅起到預(yù)防乙型肝炎病毒的感染，沒有治療作用。

2、佐劑可以增強(qiáng)細(xì)胞免疫，體液免疫，活T細(xì)胞，上調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá)，增強(qiáng)免疫記憶，并能改變其免疫反應(yīng)類型。因此對(duì)佐劑進(jìn)行改良可能增強(qiáng)傳統(tǒng)乙型肝炎亞單位疫苗細(xì)胞疫免有望使之成為治療性疫苗。左旋咪唑(levamisole，LMS)是一種咪唑類似物，最初廣泛的用動(dòng)物和人驅(qū)除體內(nèi)寄生蟲。近年米許多研究報(bào)道表明，LMS是一種良好的免疫增強(qiáng)劑它能使受抑制的吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞功能恢復(fù)正常，可以作為一種佐劑物質(zhì)用丁癌癥治療的研究。我們實(shí)驗(yàn)室近年來對(duì)左旋咪唑的

3、佐劑作用進(jìn)行了人量的研究，發(fā)現(xiàn)左旋咪唑能夠增強(qiáng)口蹄疫疫苗滅活疫苗的細(xì)胞免疫和體液免疫，并初步探索了作用機(jī)理。本研究利用LMS與傳統(tǒng)的乙型肝炎亞單位疫苗混合免疫C57BL/6小鼠，檢測產(chǎn)生的體液和細(xì)胞免疫水平，結(jié)果表明在免疫后21天，LMS誘導(dǎo)產(chǎn)生了較高水平的IgG利IgG2a/IgG1的比率；LMS刺激產(chǎn)生了較強(qiáng)的T細(xì)胞增值和CTL反應(yīng)。為進(jìn)一步探討LMS作為佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用機(jī)理，對(duì)細(xì)胞因子和DC細(xì)胞表面分子進(jìn)行進(jìn)行檢測，結(jié)果表明

4、LMS能夠上調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá)和上調(diào)DC表面分子CD11c的表達(dá)。同時(shí)在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上研究了不同濃度的LMS與乙型肝炎亞單位苗疫分開或混合免疫C57BL/6小鼠，結(jié)果表明在免疫后21天，1％LMS分開或混合免疫均能誘導(dǎo)產(chǎn)生了較高水平的IgG和IgG2a/IgG1的比率：1％LMS分開或混合免疫均能刺激產(chǎn)生了較強(qiáng)的T細(xì)胞增值和CTL反應(yīng)，進(jìn)一步探討LMS作為佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用機(jī)理，1％LMS分開或混合免疫都上調(diào)CD4<'+>T細(xì)胞IL

5、-4，IFN-γ和CD8<'+>T細(xì)胞IFN-γ表達(dá)。以上研究結(jié)果表明1％LMS與乙型肝炎亞單位苗疫分開或混合免疫能夠增強(qiáng)其細(xì)胞免疫效果。 DNA疫苗能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生有效免疫反應(yīng)，尤其是能夠產(chǎn)生有效的細(xì)胞免疫的優(yōu)點(diǎn)，在許多疫苗的研究中已經(jīng)取得很人進(jìn)步，可以彌補(bǔ)了傳統(tǒng)乙型肝炎疫苗的不足。但是DNA疫苗在大動(dòng)物和人體中的免疫效力尚不理想，因此如果克服DNA疫苗的不足，乙型肝炎DNA疫苗有望成為HBV治療性疫苗。4-1BBL，OX40L，

6、和CD70是APC細(xì)胞進(jìn)行抗原遞呈的第二信號(hào)，能夠增強(qiáng)T細(xì)胞的活化增殖，分化，增強(qiáng)CTL反應(yīng)，延K T細(xì)胞的存活時(shí)間和增強(qiáng)免疫記憶。因此在本實(shí)驗(yàn)中我們利用4-1BBL，OX40L，和 CD70二種共刺激分子作為分子佐劑與乙型肝炎DNA疫苗一起免疫C57BL*6小鼠，結(jié)果表明在免疫后42天，這二種共刺激分子佐劑均能很好的誘導(dǎo)產(chǎn)生了較高水平的IgG利IgG2a/IgG1的比率；產(chǎn)生較強(qiáng)的T細(xì)胞增值和CTL反應(yīng)，同時(shí)能夠上調(diào)CD4<'+>T細(xì)

7、胞IL-4，IFN-γ和CD8<'+>T細(xì)胞1FN-γ的表達(dá)。同時(shí)對(duì)其能否增強(qiáng)免疫記憶反應(yīng)也進(jìn)行研究，其結(jié)果表明，這二種共刺激分子均能增加記憶性T細(xì)胞的數(shù)目，增強(qiáng)免疫記憶反應(yīng)；并進(jìn)一步分析增強(qiáng)免疫記憶反應(yīng)機(jī)理，對(duì)免疫記憶反應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明這三種共刺激分子作為佐劑均能上調(diào)BCL-2，Spi2A，IL-7Ra和IL-15Ra的表達(dá)，說明其佐劑功能在免疫記憶方面也有一定的影響。以上研究結(jié)果表明4-1BBL，OX40L，和C