川芎嗪對(duì)凝血酶誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、組織因子(tissue factor，TF)是體內(nèi)生理性止血和病理性血栓形成中凝血反應(yīng)的重要啟動(dòng)因子。TF是一種跨膜糖蛋白，它既是凝血因子VII(FVII)和激活的VII因子(FVIIa)的受體，又是FVIIa的輔因子。它與FVII或FVIIa形成復(fù)合物，通過激活FIX和FX來啟動(dòng)凝血過程。 最近的研究表明，TF除了參與凝血過程以外，還參與炎癥反應(yīng)。在凝血一炎癥網(wǎng)絡(luò)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的TF是炎癥和血栓形成的重要銜接物之一。血管

2、內(nèi)皮細(xì)胞通過產(chǎn)生不同的促凝和抗凝活性物質(zhì)，維持凝血與抗凝系統(tǒng)之間的平衡，調(diào)節(jié)生理性止血和病理性血栓形成。血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞表達(dá)TF異常與許多疾病過程中的血栓事件密切相關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化、敗血癥、急性心腦血管血栓栓塞事件和DIC等等。許多炎癥細(xì)胞因子可以刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)TF。凝血酶(thrombin)是一個(gè)生物活性很廣的物質(zhì)，除參與凝血反應(yīng)，促使血栓性疾病的發(fā)生發(fā)展外，也參與體內(nèi)炎癥反應(yīng)。 川芎嗪(tetram

3、ethylpyrazine，TMP)是從中藥川芎的根莖中提取的有效成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)為四甲基吡嗪。川芎嗪具有細(xì)胞保護(hù)、抗氧化、抗血小板聚集等多種作用。但川芎嗪是否影響凝血酶誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞促凝活性增加及其機(jī)制尚未見報(bào)道。 研究目的:①觀察凝血酶對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304 TF表達(dá)的影響以及TMP對(duì)其的干預(yù)作用；②探討TMP干預(yù)凝血酶誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的作用機(jī)制。 方法:臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304培養(yǎng)采

4、用RPMI-1640完全培養(yǎng)基；MTT測(cè)細(xì)胞活力；一期凝固法測(cè)總的細(xì)胞促凝活性(PCA)：采用RT-PCR的方法檢測(cè)TF mRNA；免疫組織化學(xué)染色觀察NF-KB的變化。 結(jié)果: ①不同濃度的凝血酶(1.25～20 U／ml)能呈劑量依賴性地誘導(dǎo)ECV304細(xì)胞的PCA增加(r=O.9602，P<0.01)，在20 U／ml達(dá)到峰值。②單用TMP(125～1000 u g／ml)對(duì)ECV304細(xì)胞PCA沒有影響(p>0.20)。

5、但在給予凝血酶之前30 min用TMP(125～1000 u g／ml)預(yù)處理ECV304細(xì)胞，凝血酶(20 U／ml)刺激ECV304細(xì)胞PCA(r=0.9644，p<0.01)和TF mRNA(r=0.9576，p<0.05)增加的作用明顯地受抑制，并存在顯著量效關(guān)系，1000μ g／ml時(shí)其抑制作用最強(qiáng)。③一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L-NAME可明顯地抑制TMP拮抗凝血酶促進(jìn)ECV304細(xì)胞PCA和TF mRNA增加的作用(p<

6、0.05)。④免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)凝血酶作用45min可引起ECV304細(xì)胞NF-k B從胞漿移入核內(nèi)；TMP預(yù)處理15 min可抑制凝血酶引起的ECV304細(xì)胞內(nèi)NF-k B的轉(zhuǎn)位。 結(jié)論:①凝血酶能誘導(dǎo)ECV304細(xì)胞表達(dá)TF,TMP具有在mRNA水平抑制凝血酶刺激ECV304細(xì)胞TF表達(dá)的作用；②NO途徑參與了TMP抑制凝血酶誘導(dǎo)ECV304細(xì)胞TF表達(dá)的作用；③TMP和凝血酶可能通過影響NF-k B的活化來改變TF的表達(dá)