川芎嗪對凝血酶誘導血管內皮細胞組織因子表達的影響及機制研究.pdf

1、組織因子(tissue factor，TF)是體內生理性止血和病理性血栓形成中凝血反應的重要啟動因子。TF是一種跨膜糖蛋白，它既是凝血因子VII(FVII)和激活的VII因子(FVIIa)的受體，又是FVIIa的輔因子。它與FVII或FVIIa形成復合物，通過激活FIX和FX來啟動凝血過程。 最近的研究表明，TF除了參與凝血過程以外，還參與炎癥反應。在凝血一炎癥網絡中，血管內皮細胞表達的TF是炎癥和血栓形成的重要銜接物之一。血管

2、內皮細胞通過產生不同的促凝和抗凝活性物質，維持凝血與抗凝系統(tǒng)之間的平衡，調節(jié)生理性止血和病理性血栓形成。血管內皮細胞、單核細胞表達TF異常與許多疾病過程中的血栓事件密切相關，包括動脈粥樣硬化、敗血癥、急性心腦血管血栓栓塞事件和DIC等等。許多炎癥細胞因子可以刺激血管內皮細胞和單核細胞表達TF。凝血酶(thrombin)是一個生物活性很廣的物質，除參與凝血反應，促使血栓性疾病的發(fā)生發(fā)展外，也參與體內炎癥反應。 川芎嗪(tetram

3、ethylpyrazine，TMP)是從中藥川芎的根莖中提取的有效成分，化學結構為四甲基吡嗪。川芎嗪具有細胞保護、抗氧化、抗血小板聚集等多種作用。但川芎嗪是否影響凝血酶誘導的血管內皮細胞促凝活性增加及其機制尚未見報道。 研究目的:①觀察凝血酶對人臍靜脈血管內皮細胞株ECV304 TF表達的影響以及TMP對其的干預作用；②探討TMP干預凝血酶誘導血管內皮細胞TF表達的作用機制。 方法:臍靜脈血管內皮細胞株ECV304培養(yǎng)采

4、用RPMI-1640完全培養(yǎng)基；MTT測細胞活力；一期凝固法測總的細胞促凝活性(PCA)：采用RT-PCR的方法檢測TF mRNA；免疫組織化學染色觀察NF-KB的變化。 結果: ①不同濃度的凝血酶(1.25～20 U／ml)能呈劑量依賴性地誘導ECV304細胞的PCA增加(r=O.9602，P<0.01)，在20 U／ml達到峰值。②單用TMP(125～1000 u g／ml)對ECV304細胞PCA沒有影響(p>0.20)。

5、但在給予凝血酶之前30 min用TMP(125～1000 u g／ml)預處理ECV304細胞，凝血酶(20 U／ml)刺激ECV304細胞PCA(r=0.9644，p<0.01)和TF mRNA(r=0.9576，p<0.05)增加的作用明顯地受抑制，并存在顯著量效關系，1000μ g／ml時其抑制作用最強。③一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L-NAME可明顯地抑制TMP拮抗凝血酶促進ECV304細胞PCA和TF mRNA增加的作用(p<

6、0.05)。④免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)凝血酶作用45min可引起ECV304細胞NF-k B從胞漿移入核內；TMP預處理15 min可抑制凝血酶引起的ECV304細胞內NF-k B的轉位。 結論:①凝血酶能誘導ECV304細胞表達TF,TMP具有在mRNA水平抑制凝血酶刺激ECV304細胞TF表達的作用；②NO途徑參與了TMP抑制凝血酶誘導ECV304細胞TF表達的作用；③TMP和凝血酶可能通過影響NF-k B的活化來改變TF的表達