花鱸繁殖相關基因的克隆及其在雄性個體中的表達調控分析.pdf

1、本文以山東近海網箱養(yǎng)殖的雄性花鱸(Lateolabrax maculatus)為研究對象，采用組織學、內分泌學和分子生物學等方法，研究花鱸精巢發(fā)育特定時期給予激素和鹽度處理后其繁殖生理功能的變化規(guī)律及分子機制等。研究結果和結論如下:
　　1.花鱸繁殖相關基因的克隆
　　采用RACE技術，利用5'和3'特異引物獲得基因全長cDNA序列?？寺〉玫交|繁殖相關的全長基因共12個，分別為(GTHa亞基、FSHβ亞基、LHβ亞基、St

2、AR、AMH、FTZ-F1a、FTZ-F1b、CYP171、3β-HSD、vasa、cGnRH-Ⅱ和PRL)，以及非全長基因6個（CYP17-Ⅱ、FSHR、PRLR、GR、AR、SOX9）。通過Clustal W進行多序列比對并利用MEGA5.0軟件進行系統(tǒng)進化分析，結果顯示所獲得的基因在進化上具有高的保守性且都與鱸形目相應物種的親緣關系最近。
　　2.花鱸繁殖相關基因的周期和空間表達
　　對花鱸繁殖相關基因(GTHs亞基、

3、StAR、AMH、FTZ-F1、CYP171、3β-HSD和AR)在繁殖周期內的表達情況進行分析，發(fā)現所檢測基因的表達量在繁殖周期內都發(fā)生了顯著變化，暗示了它們參與了花鱸精巢發(fā)育和繁殖過程。對于這些基因的空間表達模式研究發(fā)現，它們都在類固醇生成相關組織如精巢、腦、垂體、肝臟、頭腎等中表達量高，但在其他組織中也可以檢測到基因表達信息。采用原位雜交技術檢測精巢內CYP17Ⅰ和3β-HSD基因的定位，發(fā)現這兩個基因都在精巢間質區(qū)域檢測到陽性信

4、號。同時結合組織學和激素水平的研究，從而對花鱸繁殖相關基因的功能進行更深入的探索。
　　3.雄性花鱸在激素處理后的組織學、睪酮水平及繁殖相關基因表達量的變化
　　給予雄性花鱸注射hCG/GnRHa后，發(fā)現精巢生殖細胞發(fā)育程度提高，血清中睪酮含量升高。外源激素對腦、垂體和精巢內GTHs亞基基因，精巢中的StAR、FTZ-F1、CYP171、3β-HSD以及腦中的AR基因的表達具有促進作用，而對于精巢內的AMH和AR基因的mRN

5、A表達有抑制作用。依據這些結果推測外源激素可以促進雄性花鱸精巢細胞的發(fā)育，而且所檢測的基因都受到促足性腺激素和促性腺激素釋放激素的調控。
　　4.雄性花鱸在鹽度處理后滲透壓水平、精巢組織學、激素水平及繁殖相關基因表達量的變化
　　經過半咸水和淡水處理1-8d后，發(fā)現花鱸血清滲透壓水平顯著降低，這與血清中睪酮水平(1-6d)以及精巢組織學變化情況一致。淡水組中，血清FSH和LH濃度降低，而在半咸水組和淡水組鹽度適應的前兩天，垂