IL-10對心力衰竭患者外周血單個核細(xì)胞促炎性細(xì)胞因子分泌和核轉(zhuǎn)錄因子κB活化的影響.pdf

1、目的：探討心力衰竭(heartfailure，HF)患者外周血單個核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)核因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)活化與促炎性細(xì)胞因子(cytokinesCK)分泌的相關(guān)性；白細(xì)胞介素10(interleukin10，IL-10)對HF患者PBMCs促炎性細(xì)胞因子分泌和NF-κB活化的影響及IL-10抑制細(xì)胞因子的可能機(jī)制，為IL-10應(yīng)用于

2、治療HF提供理論依據(jù)。 方法：①取15例心力衰竭患者和15例正常人(健康對照組)的清晨空腹外周靜脈血8ml，肝素抗凝，4ml血液用于提取血清檢測細(xì)胞因子。另4ml外周靜脈血用淋巴細(xì)胞分離液分離PBMCs，用含10％小牛血清的1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞數(shù)量為2×107/ml，取30ul細(xì)胞懸液涂在載玻片上，室溫下風(fēng)扇吹干，純丙酮固定30分鐘，干燥后保存，用于檢測NF-κB活性。②取15例HF患者和15例正常人清晨外周靜脈血8ml，肝素

3、抗凝，用淋巴細(xì)胞分離液分離PBMCs，每組15例，分三組對PBMCs進(jìn)行培養(yǎng)：第一組用含10％小牛血清、100u/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)作為空白對照組；第二組用含有10％小牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素和LPS(1ug/ml)的1640培養(yǎng)基作為LPS組。第三組用含有10％小牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素、LPS(1ug/ml)和IL-10(10ng/ml)的培

4、養(yǎng)基培養(yǎng)作為IL-10干預(yù)組。把含有PBMCs的培養(yǎng)板放在含5％二氧化碳的孵箱中37℃孵育24小時，收集培養(yǎng)液離心，吸取上清液用于檢測細(xì)胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)，對余下的PBMCs進(jìn)行收集，用1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞數(shù)為2×107，取30ul細(xì)胞懸液涂于載波片上，室溫風(fēng)扇吹干，純丙酮固定30分鐘，保存待測，用于檢測NF-κB活性，PBMCs的NF-κB活性用免疫組化染色檢測，血清及培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子的含量由放射免疫法測定

5、。對指標(biāo)進(jìn)行t檢驗(yàn)及相關(guān)分析。 結(jié)果：①HF患者外周血TNF-a、IL-6含極顯著高于對照組(2.34±0.51ng/LVS1.70±0.58ng/L,164.88±17.58pg/LVS44.91±29.41pg/L，P＜0.01)；IL-1β含量顯著高于健康對照組(0.90±0.22ng/LVS0.72±0.17ng/L，P＜0.05)。心衰患者外周血單個核細(xì)胞NF-κB核染色陽性百分率極顯著高于健康對照組(25％±13％V

6、S8％±4％，P＜0.01)。通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)：外周血單個核細(xì)胞NF-κB核染色陽性百分率與IL-1β、TNF-a、IL-6均呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r值分別為0.369，0.465，0.866，P值分別為＜0.05，＜0.01，＜0.01)；②HF患者PBMCs體外培養(yǎng)上清液的細(xì)胞因子水平：LPS組比空白組TNF-a、IL-1β極顯著升高(29.03±21.50ng/LVS10.63±5.21ng/L，2.30ng/L±1.65ng/L

7、VS0.95±0.36ng/L，P＜0.01)；IL-6呈極顯著升高(2084.57±1850.50pg/LVS697.41±425.41pg/L，P＜0.05)。IL-10組比LPS組TNF-a顯著降低(15.20±10.80ng/LVS29.03±21.50ng/L，P＜0.05)；IL-1β、IL-6呈極顯著降低(0.73±0.48ng/LVS2.30±1.65ng/L,670.83±664.36pg/LVS2084.57±185

8、0.50pg/L，P＜0.01)。心衰患者體外培養(yǎng)的單個核細(xì)胞NF-κB胞核染色陽性率：LPS組比空白組極顯著升高(38％±9％VS22％±8％，P＜0.01)；IL-10組比LPS組極顯著降低(18％±7％VS38％±9％，P＜0.01)。通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)：心衰患者體外培養(yǎng)的PBMCs的NF-κB核染色陽性百分率與IL-1β、TNF-a、IL-6呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r值分別為0.323、0.310、0.723，P值分別為＜0.05、

9、＜0.05、＜0.01)。③健康組正常人PBMCs體外培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子：LPS組比空白組TNF-a、IL-6顯著升高(15.47±11.65ng/LVS1.79±1.36ng/L，760.13±549086pg/LVS329.32±280.57pg/L，P＜0.05)；IL-1β極顯著升高(0.86±0.27ng/LVS0.60±0.18ng/L，P＜0.01)；IL-10組比LPS組TNF-a、IL-6顯著降低(4.82±2.83n

10、g/LVS15.47±11.65ng/L，360.93±326.32pg/LVS760.13±549.86pg/L,P＜0.05)；IL-1β極顯著降低(0.43±0.18ng/LVS0.86±0.27ng/L，P＜0.01)。其培養(yǎng)的PBMCs的NF-κB核染色陽性百分率：LPS組比空白組極顯著升高(27％±13％VS9％±2％，P＜0.01)；IL-10組比LPS組顯著降低(16％±9％VS27％±13％，P＜0.05)。通過相關(guān)分

11、析發(fā)現(xiàn)：健康正常人培養(yǎng)的PBMCs的NF-κB核染色陽性百分率與IL-1β、TNF-a、IL-6呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r值分別為0.301、0.792、0.327，P值分別為＜0.05、＜0.01、＜0.05)； 結(jié)論：①心力衰竭患者NF-κB表達(dá)增高，細(xì)胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)分泌增多。在心力衰竭患者，可能通過NF-κB表達(dá)的上調(diào)促進(jìn)細(xì)胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)的分泌。②IL-10可下調(diào)細(xì)胞因