一個新的抗EGFR抗體的確認及機制研究.pdf

1、EGFR家族成員的功能異常是腫瘤發(fā)生過程中的一個關鍵步驟?？笶GFR治療藥物，例如西妥昔單抗，已經(jīng)在臨床上被廣泛應用于治療EGFR陽性的腫瘤。但是，為何抗EGFR治療能夠達到良好的治療效果，其潛在的作用機制仍舊沒有完全被闡述清楚。在本文中，通過噬菌體表面展示技術，篩選得到了400株抗EGFR胞外區(qū)的單鏈抗體，其中一株，名為YAH627，在體外腫瘤細胞生長抑制模型中顯示了最強的抗腫瘤活性，其效果甚至強于西妥昔單抗。使用表位淘選技術，發(fā)現(xiàn)Y

2、AH627能夠結合到EGFR分子上DomainⅡ和DomainⅣ區(qū)域，名為YAH627，該抗體對EGFR有極強的親和力和特異性。更有意思的是，盡管YAH627并不占據(jù)EGFR受體上DomainⅠ和DomainⅢ的EGF結合位點，但抗體的存在仍舊能夠非常顯著的降低EGF和受體的結合。隨后，通過免疫共沉淀技術，發(fā)現(xiàn)識別EGFR分子domainⅡ/Ⅳ區(qū)域的抗體YAH627不僅能夠阻礙配體的結合，還能夠抑制受體分子間的二聚化，因此具有強于西妥昔

3、的治療效果。
　　在EGFR同源二聚體結構中，Y246和Y251殘基和R285，F(xiàn)263殘基相互作用。在本文中，發(fā)現(xiàn)Y246和Y251殘基落在YAH627的識別表位中。為了驗證這一猜測，通過PCR技術將EGFR分子上這些位點突變?yōu)楸彼?，并觀察到這個突變對EGFR/HER3分子的異源二聚化有非常大的影響。因此，突變數(shù)據(jù)說明EGFR/HER3的異二聚化同樣依賴于EGFR二聚化臂區(qū)域正確的接觸。從細胞信號通路和腫瘤增殖方面的實驗顯示用

4、西妥昔去阻止配體的結合并不比YAH627更有效。這可能是因為YAH627能夠改變EGFR的構象，在阻止受體分子二聚化的同時，能夠降低受體分子和配體的親和力。
　　綜上所述，通過噬菌體表面展示技術，篩選得到了一株抗EGFR單抗，克隆號YAH627，他能夠抑制EGFR和HER3分子之間的異源二聚化。同時，YAH627和EGFR的結合還能夠改變EGFR的構象，抑制EGF和EGFR的結合。因此具有強效的腫瘤抑制作用，特別是YAH627和西