新型抗EGFR“前抗體偶聯(lián)藥物”的制備及功能研究.pdf

1、近年來，抗體偶聯(lián)藥物(ADC)已在臨床腫瘤治療中展現(xiàn)出良好的治療效果。但是，針對EGFR靶點的抗體偶聯(lián)藥物的研發(fā)卻面臨著巨大挑戰(zhàn)，其原因正是由于EGFR在人體內(nèi)分布較為廣泛，從腫瘤到正常組織如上皮組織的許多組織均有表達(dá)。前期，我們利用Pro-Antibody技術(shù)開發(fā)出針對EGFR靶點的前抗體，該抗體具有在腫瘤微環(huán)境中被特異性激活并靶向EGFR的特性，命名為PanP。在本研究中我們基于前期的成果，首次構(gòu)建并表達(dá)了針對EGFR靶點的前抗體偶

2、聯(lián)藥物(pro-antibody-drugconjugate，PDC)PanP-DM1，簡稱PDC。期望通過前抗體技術(shù)和抗體偶聯(lián)藥物這兩種技術(shù)的聯(lián)合運用，使該PDC既能獲得腫瘤組織EGFR位點的特異性結(jié)合活性，又能獲得比常規(guī)抗體更強的腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)，降低抗EGFR抗體的皮膚毒性反應(yīng)。本課題在PDC藥物制備完成后首先使用SEC-UPLC、LC-MS等技術(shù)對其進行了表征，并結(jié)合UV/VIS方法完成了DAR值的測定。SEC-UPLC結(jié)果顯示

3、，我們制備的PDC純度在95％以上，與PanP相比無明顯差異;LC-MS對其脫糖后完整蛋白的分析結(jié)果也顯示，該PDC精確分子量符合理論序列分子量，去卷積質(zhì)譜譜圖符合抗體偶聯(lián)藥物特征性多簇峰型結(jié)構(gòu)，呈正態(tài)分布，以攜帶2～4個DM1為主;通過質(zhì)譜峰強度積分并且結(jié)合UV/VIS測定法對DAR值進行測定，結(jié)果表明我們制備的PDC其DAR值在4.2左右，符合常規(guī)ADC藥物的最佳藥物-抗體偶聯(lián)比例(Drug-antibody Ratio，DAR)。

4、另外，我們的實驗數(shù)據(jù)顯示，偶聯(lián)DM1之后的PDC藥物依然保持了能被腫瘤組織特異性酶(uPA)酶切激活的特性。在體外、體內(nèi)功能研究中，我們制備的新型PDC藥物也表現(xiàn)出比PanP更強的抗腫瘤活性，尤其是在小鼠移植瘤模型中，使用PDC抗體治療的實驗組小鼠在治療結(jié)束后，腫瘤組織完全消除。為進一步研究該PDC藥物的抗腫瘤作用機制，我們通過流式細(xì)胞術(shù)，研究了細(xì)胞周期阻滯效應(yīng)，結(jié)果表明PDC被腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞后能在溶酶體的作用下釋放大量的微管抑制劑藥物—