ΔNp63在小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)及在胚泡著床過(guò)程中作用的初步研究.pdf

1、胚泡著床是人類和哺乳動(dòng)物生殖過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，也是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵，然而其機(jī)制尚未完全明了。在“窗口期"胚泡著床涉及胚胎與母體子宮間極其復(fù)雜而精細(xì)的多因素的協(xié)同作用。研究發(fā)現(xiàn)，在這一過(guò)程中各類調(diào)控因子有著特異的時(shí)空表達(dá)，它們誘發(fā)了著床過(guò)程的各個(gè)階段，已成為胚泡著床的分子標(biāo)記。 大量研究顯示，胚泡著床和腫瘤轉(zhuǎn)移在細(xì)胞的遷移、侵入等方面非常相似。從發(fā)生學(xué)的角度看，胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生在細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)和分化等方面有許多共同特點(diǎn)，

2、尤其是它們都具有驚人的分裂能力及受原癌基因調(diào)控。 截?cái)嘈蚿63(△№63)是p53基因家族成員之一，表達(dá)于子宮、胎盤(pán)、唾液腺、腎臟、前列腺、皮膚、胸腺等組織。已經(jīng)肯定的是△Np63以顯性失活的方式抑制依賴TAp63和p53的靶基因的轉(zhuǎn)錄而起到癌基因的功能，有利于腫瘤的發(fā)生發(fā)展。然而△Np63在小鼠動(dòng)情周期及妊娠早期中的表達(dá)情況及其對(duì)胚胎著床的影響國(guó)內(nèi)外仍無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。 目的： 本課題旨在通過(guò)研究△Np63在小鼠子宮

3、內(nèi)膜表達(dá)的規(guī)律性變化及其對(duì)胚泡植入的影響，來(lái)初步探討它在小鼠生殖中的作用。 方法： 1．收集動(dòng)情周期各期和早孕2、3、4、5天小鼠子宮內(nèi)膜，共8組，每組10只小鼠。①運(yùn)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測(cè)定△Np63mRNA的表達(dá)；②免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)小鼠子宮內(nèi)膜中△Np63蛋白的表達(dá)情況； 2．于孕4天小鼠子宮角注射抗△Np63的單克隆抗體，孕8天觀察著床率，分析△Np63對(duì)小鼠胚泡著床的影響。

4、 結(jié)果： 1.RT-PCR：動(dòng)情前期△Np63mRNA表達(dá)明顯；動(dòng)情間期和動(dòng)情期表達(dá)減弱；動(dòng)情后期未檢測(cè)到其表達(dá)；△Np63mRNA在早孕小鼠子宮內(nèi)膜表達(dá)顯著，孕5天達(dá)最高。 2．免疫組織化學(xué)：△Np63蛋白在間質(zhì)細(xì)胞胞漿表達(dá)；△Np63蛋白的表達(dá)規(guī)律基本上與mRNA水平的表達(dá)規(guī)律相似。 3．于孕4天子宮角注射抗△Np63單克隆抗體，觀察結(jié)果顯示注射抗體2u1×200ug／ml組，胚泡著床率由對(duì)照組的75