脂質(zhì)體制備和電融合實驗研究.pdf

1、脂質(zhì)體是磷脂雙分子層膜在水相中組裝成的內(nèi)部為水相的閉合囊泡。脂質(zhì)體具有雙親性、生物相容性，和細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜具有類似的結(jié)構(gòu)，在美容、食品、醫(yī)藥和生物化學(xué)研究等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。粒徑大于1μm的大脂質(zhì)體是一種常用的轉(zhuǎn)染工具，另外它還是很好的探索細(xì)胞功能的工具，可以作為微反應(yīng)器來模擬細(xì)胞或細(xì)胞器，研究體內(nèi)的生物化學(xué)反應(yīng)，以及細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)、功能和膜穿孔、融合的機制等。大脂質(zhì)體的制備方法主要有傳統(tǒng)的薄膜蒸發(fā)法、兩相蒸發(fā)法和新興的電場制備法、

2、微流控制備法等，各種方法制備得到的脂質(zhì)體具有不同的特性。
　　 脂質(zhì)體融合技術(shù)能夠促發(fā)微量物質(zhì)間的反應(yīng)，模擬體內(nèi)細(xì)胞或細(xì)胞器內(nèi)的生物化學(xué)反應(yīng)，實現(xiàn)在微觀水平對生命體內(nèi)的各種生物化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行研究。另外在基因轉(zhuǎn)染、細(xì)胞器監(jiān)測、藥物定點傳送和細(xì)胞膜蛋白的生物物理學(xué)研究等方面有很重要的意義，還可作為研究細(xì)胞膜融合機理的模型。對脂質(zhì)體融合技術(shù)的研究經(jīng)歷了物理促進(jìn)融合、脂質(zhì)體群電融合、微操作-電脈沖結(jié)合的融合法等幾個發(fā)展階段。其中微操作-電

3、脈沖結(jié)合的脂質(zhì)體融合法實現(xiàn)了對脂質(zhì)體的可控融合，與其他方法相比具有精確操作、可控制性強、融合率高等優(yōu)點，但仍存在設(shè)備昂貴、操作方法復(fù)雜、耗時長等缺點。近年來，又涌現(xiàn)出一種基于微電極芯片的脂質(zhì)體電融合技術(shù)。本課題組研制了多種電融合芯片，并成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的高效率電融合。脂質(zhì)體融合和細(xì)胞融合的本質(zhì)都是膜融合。為了制備一種適合于脂質(zhì)體電融合的微電極芯片，本文將利用課題組已有的電融合芯片進(jìn)行脂質(zhì)體電融合實驗，摸索脂質(zhì)體融合的條件，為進(jìn)一步開展

4、脂質(zhì)體.細(xì)胞融合和脂質(zhì)體電融合芯片的研制奠定基礎(chǔ)。
　　 本文首先對薄膜分散法、兩相蒸發(fā)法、電場制備法等大脂質(zhì)體制備方法進(jìn)行了對比實驗研究，同時研究了膽固醇含量以及離心處理對大脂質(zhì)體穩(wěn)定性的影響，并最終制備電融合用的脂質(zhì)體懸液。然后利用課題組現(xiàn)有的兩種電融合芯片分別搭建了實驗平臺，在平臺上開展了脂質(zhì)體電融合的相關(guān)實驗：基于PI基底的電融合芯片和基于硅玻基底的電融合芯片上的脂質(zhì)體排隊實驗研究；基于硅玻基底的電融合芯片上的脂質(zhì)體電融