開心膠囊抗大鼠心室重構(gòu)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究.pdf

1、目的 觀察開心膠囊對(duì)心梗后14周大鼠心臟形態(tài)、舒張收縮功能變化的影響，探討蛋白激酶C及ERK1/2活性作為腎素-血管緊張素系統(tǒng)下游信號(hào)因子在心室重構(gòu)過程中的作用及開心膠囊的影響，進(jìn)一步闡明開心膠囊抗大鼠心梗后心室重構(gòu)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。 方法 1．大鼠心肌梗塞模型的制作及分組選用雄性Wistar大鼠，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈主干造成心肌梗塞模型36只。隨機(jī)抽簽法均分為3組：開心膠囊組、卡托普利組、模型組；假手術(shù)組大鼠12只，除

2、不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。開心膠囊組：灌胃10g/k g·d開心膠囊水煎液；卡托普利組：灌胃10ml/kg卡托普利1g/L混懸液；假手術(shù)組和模型組：正常飲水。連續(xù)給藥14周。 2．多普勒超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)心肌梗塞大鼠心功能采用多普勒超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)各組大鼠心功能。探頭頻率為12 MHz，采用標(biāo)準(zhǔn)的左室長(zhǎng)軸切面、心尖四腔心切面、五腔心切面，同時(shí)記錄心電圖，以R波頂峰為舒張末期，以T波末為收縮末期，仔細(xì)觀察心臟的形

3、態(tài)、室壁運(yùn)動(dòng)幅度及收縮期增厚率，用Simpsons法測(cè)定射血分?jǐn)?shù)(EF)值。形態(tài)學(xué)指標(biāo)包括：左室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)及收縮末期內(nèi)徑(LVDs)，左室舒張末期左室后壁厚度(LVPWd)，左室收縮末期左室后壁厚度(LVPWs)。收縮功能指標(biāo)包括：射血分?jǐn)?shù)(EF)、短軸縮短率(FS)。比較各組大鼠心臟形態(tài)及心室功能變化。 3．心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比測(cè)量多普勒超聲心動(dòng)圖檢查完畢后處死大鼠，處死前測(cè)量體重后開胸取出心臟，在冰生理鹽水中洗去

4、血液，用濾紙吸去水分后電子天平測(cè)量心臟總重量并計(jì)算心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比。比較各組大鼠心臟肥大程度。保存部分非梗塞心肌組織于超低溫冰箱，留后期實(shí)驗(yàn)用。 4．大鼠心肌結(jié)締組織染色采用Mallory三色染色法進(jìn)行心肌結(jié)締組織染色，心肌組織染成黃色，間質(zhì)膠原纖維染成藍(lán)綠色。光鏡下觀察各組大鼠心肌細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)形態(tài)及間質(zhì)結(jié)締組織增生情況。 5．開心膠囊對(duì)大鼠心梗后心肌細(xì)胞胞漿PKC的影響利用非放射性蛋白激酶C檢測(cè)試劑盒檢測(cè)大鼠心肌細(xì)胞

5、胞漿蛋白激酶C含量。比較各組大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞胞漿PKC含量。 6．開心膠囊對(duì)大鼠心梗后心肌細(xì)胞ERK1/2活性的影響Western Blot法檢測(cè)心肌梗塞大鼠心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2含量，比較各組大鼠心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2含量。 7．?dāng)?shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，兩組間計(jì)量資料以及多組間計(jì)量資料比較用單因素方差分析(ANOVA)檢驗(yàn)，組間多重比

6、較采用SNK法。P<0.05為差異有顯著性意義，P<0.01為差異有非常顯著性意義。 結(jié)果 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脫失情況實(shí)驗(yàn)過程中模型組大鼠死亡2只，余10只；假手術(shù)組大鼠死亡2只，余10只；開心膠囊組大鼠及卡托普利組大鼠各死亡1只，各余11只。共脫失6只，進(jìn)入結(jié)果分析42只。 2．開心膠囊對(duì)心肌梗塞大鼠心臟形態(tài)及心功能的影響模型組大鼠射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率低于其他3組(P<0.01)；模型組大鼠左室收縮末期左室后壁厚度大

7、于其他3組(P<0.01)；開心膠囊組與卡托普利組對(duì)比，射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率以及左室舒張末期左室后壁厚度差異無顯著性意義；假手術(shù)組的射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率大于開心膠囊組(P<0.01)。 3．開心膠囊對(duì)心肌梗塞大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比的影響模型組大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比大于其他3組(P<0.01)，而開心膠囊組與卡托普利組間的心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比差異無顯著性意義(P>0.05)。 4．開心膠囊對(duì)心肌梗塞大鼠心臟纖維化的影響大鼠心

8、肌結(jié)締組織染色結(jié)果顯示開心膠囊組及卡托普利組心肌間質(zhì)纖維化程度輕，心肌細(xì)胞可保持原有正常結(jié)構(gòu)，但與假手術(shù)組大鼠比較仍有輕微的結(jié)締組織增生；模型組心肌肌原纖維間隙明顯增寬，心肌細(xì)胞肥大，心肌細(xì)胞間纖維化程度嚴(yán)重。假手術(shù)組大鼠心肌組織未見膠原纖維增生，心肌細(xì)胞排列整齊，明暗帶清晰，形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。 5．開心膠囊對(duì)心肌梗塞大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞胞漿PKC含量的影響結(jié)果顯示，模型組大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞胞漿PKC灰度值小于其他3組(P<0.0

9、1)，開心膠囊組與卡托普利組間心肌細(xì)胞胞漿PKC灰度值差異無顯著性意義(P>0.05)。說明模型組大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞胞漿PKC含量小于其他3組，差異有顯著性意義；開心膠囊組與卡托普利組心肌細(xì)胞胞漿PKC含量差異無顯著性意義。 6．各組大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2含量比較模型組大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2與GAPDH灰度值之比大于其他3組(P<0.01)，開心膠囊組與卡托普利組間心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2與G

10、APDH灰度值之比差異無顯著性意義(P>0.05)。半定量結(jié)果反映了模型組大鼠非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2含量大于其他3組，差異有顯著性意義；開心膠囊組與卡托普利組非梗塞區(qū)心肌細(xì)胞磷酸化ERK1/2含量差異無顯著性意義。 結(jié)論 1．急性心肌梗塞大鼠模型，經(jīng)14周常規(guī)飼養(yǎng)，可出現(xiàn)心肌肥厚、心功能下降、心肌組織纖維化等表現(xiàn)，可以作為心室重構(gòu)研究的模型。 2．開心膠囊可改善大鼠心功能，可減輕心肌纖維化，保持心肌細(xì)