促凋亡蛋白（BclGs）的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究.pdf

1、促凋亡蛋白BclGs的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究中文摘要BclGs屬于僅含有BH3結(jié)構(gòu)域的促凋亡蛋白亞家族成員，其mRNA僅在睪丸中表達(dá)，使Bcl-G(Gonad)得以冠名。Bcl-G是Bcl-2家族促凋亡蛋白中獨特的新成員，其基因編碼兩個蛋白，長片段BclGL和短片段BclGs。它依靠非BH3結(jié)構(gòu)域定位于胞內(nèi)細(xì)胞器，基因定位于染色體12p12，此區(qū)域在50％的前列腺癌、30％的卵巢癌和30％的兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中表現(xiàn)為缺失性突變。當(dāng)BclG

2、s過表達(dá)時，顯示了很強的細(xì)胞毒性。它不但可被共表達(dá)的抗凋亡蛋白Bcl-xL所抑制，而且Bcl-xL也能與BclGs發(fā)生免疫共沉淀。除了與Bcl-2家族蛋白發(fā)生相互作用外，BclGs的調(diào)節(jié)機制仍需進一步闡明。我們以BclGs為誘餌，利用酵母雙雜交的方法，從人睪丸cDNA文庫中篩選出長片段BclGL、CSN5/JAB1(c-JunN端激活結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白)、與DEAF1(變形表皮自調(diào)節(jié)因子1)相似的蛋白、與LDHA(乳酸脫氫酶)相似的蛋白、與

3、GPx4(谷胱苷肽過氧化物酶4)相似的蛋白和一個新的融合蛋白(未注冊)。其中，JAB1又屬于COP9復(fù)合物的第五組分，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)植物中的光信號、線蟲中的幼蟲發(fā)育、整合素信號、細(xì)胞周期調(diào)控和甾體類激素信號傳導(dǎo)。并且，其功能主要是加強AP-1(c-Jun/c-fos)與AP-1結(jié)合位點(TRE)即AP-1啟動子區(qū)的結(jié)合力與穩(wěn)定性，從而增強AP-1反式轉(zhuǎn)錄活性。并且，巨嗜細(xì)胞移動抑制因子MIF與細(xì)胞內(nèi)蛋白JAB1相互作用，JAB1激活JNK的活

4、性，并增強內(nèi)源性磷酸化c-Jun的水平，而MIF抑制JAB1所增強的AP-1活性，但不能干擾轉(zhuǎn)錄因子NFkappaB的誘導(dǎo)。與之相反，胞外信號通過細(xì)胞表面整合素LFA-1在JAB1的介導(dǎo)下，把信號傳到核內(nèi)，激活A(yù)P-1。而HPO可進一步加強JAB1對AP-1的激活作用。它增加c-Jun的磷酸化而導(dǎo)致AP-1的激活。并且JAB1是通過非JNK途徑加強c-Jun磷酸化的，以非MAPK信號途徑，在JAB1的介導(dǎo)下激活A(yù)P-1的活性[3]。因此

5、，我們利用酵母雙雜交、體外結(jié)合實驗和細(xì)胞共定位進行驗證，表明BclGs與CSN/JAB1可以發(fā)生相互作用。雙報告基因?qū)嶒灡砻鞔俚蛲龅鞍譈clGs與JAB1發(fā)生相互作用，通過CSN5/JAB1的介導(dǎo)，降低c-Jun的磷酸化水平，抑制AP-1轉(zhuǎn)錄激活活性，從而引發(fā)細(xì)胞凋亡。在此基礎(chǔ)上，進一步研究磷酸化的JNK系列、STAT系列、AKT和LaminA等與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)的蛋白，利用Westernblot檢測其表達(dá)，結(jié)果表明：BclGs能夠降

6、低JNK的磷酸化，但通過非MAPK的途徑磷酸化JNK，從而導(dǎo)致下游事件的發(fā)生；BclGs還降低STAT3的磷酸化，但不能刺激STAT家族其它三種成員的磷酸化。BclGs使AKT表達(dá)降低，而LaminA水平表達(dá)升高。總之，促凋亡蛋白BclGs和輔助激活因子JAB1相互作用所引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是對BclGs所致的凋亡機制的補充；其中，在以BclGs-JAB1相互作用作為關(guān)鍵的分子基礎(chǔ)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，JNK和STAT3的磷酸化下降，增加了Bcl