水飛薊賓對D-氨基半乳糖誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷肝細胞脹亡的影響.pdf

1、背景:細胞脹亡是一種不同于細胞凋亡的另一種細胞死亡形式，可見于各種生理、病理過程中，其主要形態(tài)學(xué)特點為細胞腫脹，胞體增大，胞漿空泡化，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核腫脹，繼之胞膜起泡，結(jié)構(gòu)崩解，胞漿外溢，引發(fā)炎癥反應(yīng)。肝臟不僅是人體最大的消化腺，也是人體主要的代謝器官，它具有消化、吸收、代謝、排泄、解毒、造血、免疫等多種功能。肝損傷是多種肝臟疾病共有的一種病理狀態(tài)，其長期存在往往是導(dǎo)致肝纖維化，甚至肝硬化、肝癌發(fā)生的重要始動因素。因此防治肝損傷是臨

2、床肝病治療的主要環(huán)節(jié)之一。自上世紀90年代以來，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對肝損傷的認識己進入到細胞分子學(xué)水平。肝細胞脹亡見于各種急慢性肝臟疾病中，是導(dǎo)致肝功能異常的重要因素。水飛薊賓(silibinin，SIL)是水飛薊素中含量最多、活性最高、藥理作用最強的成分，具有清除活性氧、對抗脂質(zhì)過氧化、抑制一氧化氮(NO)產(chǎn)生、抑制5’-脂氧合酶、保護肝細胞膜、促進肝細胞修復(fù)、再生、免疫調(diào)節(jié)、抗肝纖維化、抗谷光甘肽(GSH)排空作用、抗腫瘤、降血脂

3、等藥理學(xué)效應(yīng)，但其對肝細胞脹亡影響方面的研究目前較少。 目的:通過D-氨基半乳糖(D-galactosamine，D-GalN)誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷，研究SIL在急性肝損傷中對肝細胞脹亡的影響，拓寬對SIL，保肝機制的研究，期望為各種肝病的診療提供更多新的思路與方法。 方法:60只SD大鼠隨機分為3組：對照組(n=12)、模型組(n=24)、SIL，干預(yù)組(n=24)，采用D-GalN腹腔注射誘導(dǎo)急性肝損傷模型。分別于致傷

4、后4h、8h、12h、16h、20h、24h取大鼠血清，全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，水平；光鏡下觀察大鼠肝臟病理學(xué)改變；透射電鏡(TEM)下觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)及細胞脹亡(oncosis)，計算脹亡指數(shù)(oncosisindex,OI)；免疫組織化學(xué)染色法檢測肝組織核因子-кB(NF-кB)的表達，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測肝組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)mRN

5、A的表達。 結(jié)果: 1.血清ALT、AST水平：注射D-GalN4h后，模型組大鼠血清ALT、AST較對照組明顯升高，兩者有顯著差異(P＜0.05)，后隨時相改變，ALT、AST水平逐漸上升，20h后達到高峰(ALT，1544.5±336.62；AST，2341.25±433.01)。SIL組與對照組各時相平行比較，均有不同程度增高，但較模型組明顯降低(P＜0.05)。 2.組織病理學(xué)特征及OI比值的檢測：病理切

6、片發(fā)現(xiàn)對照組肝組織結(jié)構(gòu)清晰、小葉完整，細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，未見漿細胞及中性粒細胞浸潤；模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，界板消失，細胞腫脹，胞漿空泡化，氣球樣變，胞膜破裂，胞漿外溢，有壞死及炎性浸潤，隨時相延長，病變加重；SIL干預(yù)組大鼠肝組織病理變化與模型組相似，但損傷程度較模型組減輕。透射電鏡下，正常肝細胞核膜結(jié)構(gòu)清晰、完整，核內(nèi)常染色質(zhì)多，異染色質(zhì)少，位于核周，其粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，層狀排列，線粒體數(shù)量較多，結(jié)構(gòu)完整，嵴豐富，基質(zhì)均勻；模型組

7、在致傷4h后即出現(xiàn)大量的細胞脹亡樣改變，表現(xiàn)為細胞體積增大、腫脹，胞膜局部向外膨隆，胞膜完整性被破壞，胞質(zhì)空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，嵴腫脹，染色質(zhì)分散或凝集成塊，分布在核仁周圍或核膜下。SIL干預(yù)組各時相OI值較模型組明顯降低(P＜0.05)。 3.肝組織NF-кB的表達：對照組肝細胞很少表達NF-Bк，或僅少量表達于細胞漿內(nèi)；模型組致傷后NF-кB表達明顯增強，由細胞漿轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)，4h時達到高峰(38.36±4.75％)；SIL

8、干預(yù)組也有不同程度的陽性表達，但較模型組明顯降低(P＜0.05)。 4.肝組織TNF-αmRNA的表達：正常對照組TNF-αmRNA表達痕量，模型組各時相點均有不同程度的表達，在致傷4h時出現(xiàn)高峰(0.965±0.17)，隨后逐漸下降。SIL干預(yù)組各時相TNF-αmRNA的表達均較模型組降低(P＜0.05)。 結(jié)論: (1)D-GalN可誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷，血清肝酶升高，肝組織中NF-кB、TNF-α表達增強，肝