內(nèi)毒素誘導(dǎo)D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究.pdf

1、目的:探討亞致死劑量的內(nèi)毒素(即脂多糖)誘導(dǎo)D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭、肝細(xì)胞凋亡情況及肝損傷發(fā)生機(jī)制。 方法:48只wistar大鼠進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照分組實(shí)驗(yàn)，分為6h、24h、和48h取材3大組，每個(gè)大組再分為處理組和正常對(duì)照組。處理組大鼠以脂多糖(50 μ g/kg)+D-半乳糖胺(300mg/kg)，用1ml無菌生理鹽水溶解后腹腔內(nèi)注射，對(duì)照組動(dòng)物僅腹腔內(nèi)注射1ml生理鹽水。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，下腔靜脈采血查丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(A

2、LT)；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和總膽紅素(TBIL)；肝組織常規(guī)固定，HE染色后光鏡檢查；肝組織細(xì)胞凋亡的檢測(cè)分別行透射電鏡檢查和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記分析(TUNEL分析)；基因表達(dá)通過逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)的方法檢測(cè)。 結(jié)果:所有處理組大鼠ALT、AST和TBIL在6h內(nèi)即顯著升高，24h達(dá)到峰值，48h仍維持于高水平。肝臟大體形態(tài)顯示所有處理組大鼠肝臟明顯水腫、失去正常紅潤光澤而略顯

3、蒼白、表面見散在的點(diǎn)狀及片狀出血點(diǎn)、質(zhì)地偏韌。HE染色可見處理6h，肝組織即呈現(xiàn)充血，碎片狀壞死和較多炎性細(xì)胞浸潤；24h肝細(xì)胞開始空泡變性、腫脹，并可見亞大塊壞死及大量炎性細(xì)胞浸潤：48h則多數(shù)肝細(xì)胞空泡狀變性，可見大片壞死，肝組織小葉結(jié)構(gòu)紊亂。透射電鏡檢查和TUNEL分析均顯示，6h、24h和48h處理組凋亡的肝細(xì)胞均比正常對(duì)照組明顯增多，24h和48h處理組的肝細(xì)胞凋亡多于6h處理組。各時(shí)間點(diǎn)TNF—αmRNA表達(dá)水平各組之間差異

4、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各處理組IL—1 β mRNA的表達(dá)均較對(duì)照組顯著升高，其高峰值出現(xiàn)于6 h:iNOSmRNA在正常對(duì)照組無表達(dá)，6h處理組有高水平表達(dá)，24h和48h則顯著降低：p53基因在對(duì)照組和6h處理組有低水平表達(dá)，在24h和48h處理組表達(dá)明顯較高。 結(jié)論:亞致死劑量脂多糖可誘導(dǎo)D-半乳糖胺致敏大鼠發(fā)生急性肝衰竭；本模型是較理想的內(nèi)毒素性急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型；肝損傷的發(fā)生與iNOS基因早期高水平的表達(dá)有密切關(guān)系；細(xì)胞