腸癌中RSPO2表達(dá)沉默的分子機(jī)制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  R-spondin2(RSPO2)作為Wnt信號通路的調(diào)節(jié)因子,被認(rèn)為在腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)RSPO2腸癌組織和細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào),在大部分腸癌中RSPO2發(fā)揮抑癌基因的功能,并且存在一種R-spondin2介導(dǎo)的LGR5依賴的Wnt信號通路負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。本課題將對腸癌中RSPO2表達(dá)沉默的分子機(jī)制進(jìn)行研究。
  方法:
  1)通過反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測腸癌組織中

2、RSPO2的mRNA表達(dá)水平。
  2)通過生物信息學(xué)軟件Methyl Primer Express vl.0 software分析RSPO2基因啟動(dòng)子區(qū)域的CpG島。
  3)通過甲基化測序PCR(BSP)和甲基化特異性PCR(MSP)檢測腸癌細(xì)胞和組織中RSPO2基因CpG島的甲基化。
  4)通過Sanger基因測序檢測腸癌組織RSPO2啟動(dòng)區(qū)基因突變情況。
  5)通過TaqMan拷貝數(shù)變異分析實(shí)驗(yàn)檢測腸

3、癌組織基因組RSPO2基因的拷貝數(shù)變化(CNV)。
  結(jié)果:
  1)腸癌組織RSPO2mRNA表達(dá)水平與癌旁組織相比確實(shí)出現(xiàn)顯著下調(diào)。
  2) MSP結(jié)果顯示9種腸癌細(xì)胞系中RSPO2基因均發(fā)生了甲基化修飾,對照細(xì)胞HEK293則無;76%的腸癌樣本的腫瘤組織發(fā)生了甲基化修飾,癌旁組織中則少很多;BSP結(jié)果顯示腸癌細(xì)胞和腸癌組織RSPO2啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)基本全部發(fā)生甲基化,而對照HEK293細(xì)胞和癌旁組織基本沒

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