慢性乙型病毒性肝炎病人CCR5基因表達的多態(tài)性研究.pdf

1、目的： 慢性乙型病毒性肝炎是一種嚴重危害我國人民健康的疾病。局部的調查顯示，國內一般人群HBsAg陽性率約為9％。這些乙肝病毒攜帶者中的大部分機體最終將病毒清除，但是仍有相當一部分攜帶者轉變成為慢性乙型肝炎。同一種病毒感染不同的宿主，產生不同的后果，說明慢性乙型病毒性肝炎的發(fā)生，除了病毒感染以外，還與宿主的遺傳易感性有關。本實驗擬觀察慢性乙肝病人和健康體檢者中CCR5基因表達的多態(tài)性情況，以探討CCR5表達和慢性乙型病毒性肝炎的

2、關系。 方法： 實驗一：實驗組病例選自本院肝病專科病房收治的慢性乙型病毒性肝炎病人，診斷標準參照2000年9月(西安)第十次全國傳染病和寄生蟲病學術會議制定的病毒性肝炎防治方案中的診斷標準，并排除以下病人：①病人重疊有丙型，丁型肝炎的；②病人合并有肝臟惡性腫瘤的。對照組選白同期在我院進行健康體檢的普通人群，并排除體檢結果中有①HBsAg陽性，②肝功能ALT或者GGT大于正常值上限③HBVDNA定量大于500copies/

3、ml的個體。實驗組病人入院后抽靜脈血，測定GGT，ALT，測定乙肝五項，對照組體檢者測定GGT，ALT和乙肝五項。同時留EDTA抗凝血標本2ml，先用簡化鹽析法提取DNA備用。對于符合入選標準的標本，進行PCR擴增。擴增后的DNA片段經限制性核酸內切酶消化。酶切產物經2.0％瓊脂凝膠電泳，最后用紫外線凝膠成像系統(tǒng)進行分析。 實驗二：病例選自本院肝病?？撇》渴罩蔚穆砸倚筒《拘愿窝撞∪耍\斷標準，排除標準同實驗一，病人入院后抽靜脈

4、血，測定HBVDNA定量，測定GGT，ALT，測定乙肝五項，同時留EDTA抗凝血標本2ml，先用簡化鹽析法提取DNA備用。對于符合入選標準的標本，后續(xù)實驗步驟同實驗一。 結果： 用特異性引物擴增的DNA片段起始于CCR5基因的97位，終止于+53位，片段長1010bp，BglⅡ識別序列A^GATCT，當503位的堿基是G時(即503位沒有發(fā)生突變)在所擴片段中僅有503位符合該識別序列的酶切位點，所以該產物片段被切成兩個

5、部分；當503位的堿基是T時(即503位發(fā)生了點突變)在所擴片段中沒有符合該識別序列的酶切位點，該產物片段不能被該酶消化。BstMCI識別序列CGAT^CG，當999位點堿基是G時(即999位沒有發(fā)生突變)在所擴片段中沒有符合該識別序列的酶切位點，該產物片段不能被該酶消化；當999位的堿基是T時(即999位發(fā)生了點突變)，1000位符合該識別序列中的酶切位點，從而使該片段可以被該酶消化，產物被分為兩個片段。 CCR5基因的503

6、位點，在慢性乙型病毒性肝炎的病人中，表達G的個體較多，而在對照的健康體檢人群中，表達T的個體較多，二者相比有顯著性差異(P＜0.005)。 同樣的，CCR5基因的999位點，在慢性乙型病毒性肝炎的病人中，表達G的個體較多，而在對照的健康體檢人群中，表達T的個體較多，二者相比有顯著性差異(P＜0.05)。 在慢性乙型病毒性肝炎病人中，CCR5基因的503、999位點同時發(fā)生變異，或者503、999位點的其中一個發(fā)生變異的病

7、人和兩個位點均不發(fā)生變異的個體之間比較，兩組病人之間的HBVDNA水平有顯著性差異(P＜0.05)，而CCR5基因的503、999位點同時發(fā)生變異，503和999位點其中一個發(fā)生變異的三組個體比較，HBVDNA水平無明顯差異(P＞0.05)。 結論： 當CCR5基因503位表達T時，和/或999位表達T時，其產物可能有保護機體免受乙型肝炎病毒侵害的作用或者有促進機體清除乙型病毒性肝炎病毒的作用，但尚不能證明二者同時變異時