SNP敏感性分子開關(guān)在基因組SNP檢測(cè)中的特異性分析及應(yīng)用.pdf

1、目的:該實(shí)驗(yàn)旨在研究SNP敏感性納米級(jí)復(fù)合分子開關(guān)在基因組SNP檢測(cè)中的特異性及應(yīng)用.方法:選擇原發(fā)性高血壓病人及正常人群各30人作為研究對(duì)象,于其肘正中靜脈采血5ml,置于10ml試管中,每管加0.5ml肝素抗凝,-20℃保存?zhèn)溆?采用經(jīng)典的酚/氯仿法提取基因組DNA,0.8％瓊脂糖凝膠電泳鑒定,紫外分光光度儀測(cè)定OD<,260/280>值,分管,-20℃保存?zhèn)溆?從dbSNP找出神經(jīng)性耳聾相關(guān)基因GJB3中C→T突變點(diǎn)及四個(gè)原發(fā)性高

2、血壓相關(guān)基因SNP位點(diǎn),即Endothelin 5370G/T,ACE 1987693C/T,AGT 699C/T和RENBP 2269371C/T,根據(jù)Genebank中的基因序列,利用BLAST進(jìn)行同源性比對(duì),按照引物設(shè)計(jì)原則,自行設(shè)計(jì)引物.應(yīng)用SNP敏感性分子開關(guān)檢測(cè)神經(jīng)性耳聾基因GJB3中C→T點(diǎn)突變,分析其在檢測(cè)單基因遺傳病點(diǎn)突變中特異性;在50℃,55℃,58℃的退火溫度下,分別使用Taq酶與Pfu酶介導(dǎo)的3'硫化修飾特異性

3、引物延伸反應(yīng)分析基因組DNA中的SNP位點(diǎn),研究SNP敏感性分子開關(guān)在基因組SNP分析中的特異性及可靠性;用梯度PCR從49℃到61.5℃大范圍的退火溫度分析Taq酶與Pfu酶介導(dǎo)的3'硫化修飾特異性引物延伸反應(yīng)在SNP分析中的特異性及可靠性,以研究SNP敏感性分子開關(guān)進(jìn)行高通量平行分析SNP的潛在可能性;PCR產(chǎn)物送至Sangon測(cè)序.結(jié)論:(1)SNP敏感性分子開關(guān)是一種特異性強(qiáng),可靠性高的可用于基因組SNP分析的新方法;(2)在大