消脂護(hù)肝膠囊對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1、PPARa基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本課題以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，在前期實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察基礎(chǔ)上，以高脂飼料聯(lián)合四環(huán)素腹腔注射制備大鼠非酒精性脂肪性肝?。╪on alcoholic fatty liver disease，NAFLD）模型，探討消脂護(hù)肝膠囊對(duì)模型鼠肝組織細(xì)胞色素P4502E1（cytochrome P4502E1，CYP2E1）和過氧化物酶體增殖物激活受體a（peroxisome proliferator—activated receptor—a，PPAR

2、a）基因表達(dá)的影響，并通過對(duì)各組肝濕重、肝指數(shù)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、肝勻漿游離脂肪酸（FFA）和肝臟病理組織學(xué)變化等指標(biāo)的比較，深入闡釋消脂護(hù)肝膠囊防治NAFLD的分子機(jī)制，揭示CYP2E1和PPARa在NAFLD發(fā)生發(fā)展中的作用及二者之間的相關(guān)性，從細(xì)胞和分子水平為NAFLD的中醫(yī)藥防治提供理論依據(jù)。 方法：SD雄性大鼠72只，隨機(jī)分為6組，分別為空白組（KB組）

3、、模型組（MX組）、東寶肝泰組（DB組）和消脂護(hù)肝膠囊高（XG組）、中（XZ組）、低（XD組）劑量組，每組12只。各組動(dòng)物均自由飲水和進(jìn)食，分籠喂養(yǎng)于20～25℃明暗各12h的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。常規(guī)飼養(yǎng)1周后，除KB組予基礎(chǔ)飼料外，其余5組均飼以高脂飼料（84％基礎(chǔ)飼料+10％豬油+5％蛋黃粉+1％膽固醇），并于造模第1天腹腔注射2％四環(huán)素溶液0．75ml/100g，1周后每6天一次腹腔注射四環(huán)素0．5ml/100g，共計(jì)6次。自造模的第2

4、周起，除KB組外，各組均按1ml/（100g·d）體積分別灌服生理鹽水及相應(yīng)藥物，每日1次。消脂護(hù)肝膠囊高、中、低劑量組分別按0．15g/100g、0．075g/100g、0．0375g/100g劑量灌胃，用量相當(dāng)于成人用藥量的20倍、10倍、5倍；東寶肝泰灌胃劑量為0．06g/100g，用量相當(dāng)于成人用藥量的10倍。每周稱鼠重一次，并相應(yīng)調(diào)整用藥劑量。第7周（末次腹腔注射后1周）實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。方法：隔夜禁食，次日以10％

5、水合氯醛溶液0．3ml/100g腹腔注射麻醉后，自腹主動(dòng)脈采血；之后迅速取出肝臟稱肝濕重；取肝組織500mg放入—70℃液氮保存待提取肝組織總RNA；取肝左葉1塊0．5cm×1cm×0．3cm組織置于10％甲醛溶液固定，備作光鏡病理切片；再取肝左葉1塊500mg制成10％肝勻漿；所采血液室溫靜置30min后分離血清備用。檢測指標(biāo)：肝濕重、肝指數(shù)、病理組織學(xué)變化、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（

6、TC）、肝勻漿FFA含量、肝組織CYP2E1、PPARa mRNA相對(duì)表達(dá)量等。 結(jié)果：1．與KB組比較：MX組肝濕重、肝指數(shù)、血清ALT、AST、TC、TG水平、肝勻漿FFA含量、肝組織CYP2E1基因表達(dá)水平均有顯著升高（P<0．01），PPARα基因表達(dá)水平顯著降低（P<0．01）；病理組織學(xué)呈中～重度脂肪變。2．與MX組比較：各用藥組肝濕重、血清ALT、AST、TC、TG和肝勻漿FFA含量均有不同程度下降，以XG、XZ組

7、療效最優(yōu)（P<0．01或P<0．05）。XG、XZ、XD組及DB組肝組織CYP2E1基因表達(dá)水平均有顯著降低（P<0．01）。XG、XZ組PPARα基因表達(dá)水平顯著升高（P<0．01）。3．與DB組比較：XZ組肝濕重改善明顯；血清ALT、AST、TG、肝勻漿FFA含量明顯降低（P<0．01或P<0．05）： XZ組抑制CYP2E1基因表達(dá)效果明顯優(yōu)于DB組（P<0．01或P<0．05）：XZ組的PPARα基因表達(dá)水平較DB組明顯升高（P

8、<0．05）。4．與XD組比較：XG、XZ組在改善病理學(xué)變化、降低肝勻漿FFA含量和血清TG、ALT水平、抑制肝組織CYP2E1基因表達(dá)、升高PPARα基因表達(dá)水平方面有明顯優(yōu)勢（P<0．01或P<0．05）； XG、XZ組相比，除AST、FFA含量XG組優(yōu)于XZ組（P<0．05）之外，其余指標(biāo)二者之間比較無顯著性差異（P>0．05）。 結(jié)論：1．采用高脂飼料聯(lián)合四環(huán)素腹腔注射可以成功復(fù)制大鼠NAFLD模型，造模時(shí)間短，成功率高

9、，是一種較為理想的造模方法。2．消脂護(hù)肝膠囊可有效降低NAFLD模型大鼠的肝濕重、肝指數(shù)、血清ALT、AST、TC、TG及肝勻漿FFA水平，改善病理組織學(xué)變化，具有顯著的抗脂肪肝作用；3．肝組織CYP2E1和PPARα基因表達(dá)水平與NAFLD的形成和發(fā)展密切相關(guān)，二者之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系；4．消脂護(hù)肝膠囊可激活PPARα mRNA表達(dá)，糾正肝臟脂質(zhì)代謝紊亂；同時(shí)可抑制CYP2E1 mRNA表達(dá)，阻止脂質(zhì)過氧化反應(yīng)；這可能是其防治NAFLD的

10、重要分子機(jī)制。5．消脂護(hù)肝膠囊增強(qiáng)大鼠PPARα的表達(dá)的同時(shí)又可抑制CYP2E1表達(dá)，故不會(huì)加重脂質(zhì)過氧化作用對(duì)肝臟的損傷，而是最終發(fā)揮了降低血脂、保肝降酶、阻止或減輕脂肪肝形成的作用。6．無論從生化指標(biāo)、病理學(xué)改變還是從CYP2E1和PPARα基因表達(dá)情況來看，消脂護(hù)肝膠囊防治NAFLD的效果均優(yōu)于東寶肝泰對(duì)照組；7．隨著劑量的增加，消脂護(hù)肝膠囊生化指標(biāo)（TC、TG、ALT、AST）及病理學(xué)獲得更明顯的改善，說明該藥在所選范圍內(nèi)存在一