美他多辛對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝組織中CYP2E1表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：通過(guò)建立酒精性脂肪肝大鼠動(dòng)物模型，探討美他多辛對(duì)大鼠預(yù)防酒精性脂肪肝的機(jī)理。研究美他多辛對(duì)大鼠肝組織CYP2El的基因表達(dá)的影響。方法清潔級(jí)雄性Wistar大鼠30只，體重200+10g，分籠飼養(yǎng)，每籠5只。在室溫及濕度穩(wěn)定條件下，按晝夜時(shí)程，全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后，隨機(jī)分為3組。①酒精性脂肪肝組（簡(jiǎn)稱(chēng)脂肪肝組），40％(v/v)乙醇，劑量8g/(kg·d)，每日分2次灌胃，間隔8-9 h，灌胃4w。自第5w開(kāi)始，將乙

2、醇濃度增至50％(v/v)，灌胃至8w。②酒精性脂肪肝預(yù)防組（簡(jiǎn)稱(chēng)預(yù)防組），乙醇灌胃時(shí)間間隔及頻率同期脂肪肝組，乙醇灌胃同期灌服美他多辛300 mg/(kg.d)。③空白對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組）：按乙醇灌胃間隔及頻率給予等體積生理鹽水。各組大鼠于灌胃8w后，腹部備皮，行影像學(xué)檢查；影像學(xué)檢查后，將全部大鼠麻醉，打開(kāi)腹腔，迅速取出肝臟，洗凈所帶血液，觀察肝組織大體形態(tài)，顏色；取肝舌葉經(jīng)4％多聚甲醛固定后石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織

3、病理學(xué)變化；采用免疫組化、RT-PCR測(cè)定肝組織中CYP2El的蛋白及基因表達(dá)，以檢測(cè)酒精對(duì)雄性酒精性肝病大鼠的CYP2El的表達(dá)的影響，以及美他多辛是否對(duì)雄性酒精性肝病大鼠CYP2El的表達(dá)有干預(yù)作用。
　　 結(jié)果大鼠酒精性脂肪肝模型建立成功，過(guò)程中，脂肪肝組有2只死亡，均為酒精誤吸入氣管所致；預(yù)防組有2只死亡，1只為酒精誤吸入氣管所致，1只為肺部感染死亡；對(duì)照組無(wú)大鼠死亡。
　　 肝臟影像學(xué)變化對(duì)照組10只大鼠肝臟B

4、超檢查示肝臟包膜光滑，回聲均質(zhì)，血管紋理清。脂肪肝組8只大鼠B超檢查示肝臟回聲稍密、稍強(qiáng)，血管紋理不清；預(yù)防組肝臟8只大鼠B超下示肝臟回聲稍密、稍強(qiáng)，血管紋理較B組顯示清晰。
　　 肝組織形態(tài)及病理學(xué)變化對(duì)照組大鼠肝臟為鮮紅色，邊緣銳利，表面光滑，切面無(wú)顆粒感；脂肪肝組、預(yù)防組肝臟形態(tài)變化相似，均有體積的增大，切面油膩。脂肪肝組肝臟顏色呈暗黃色，預(yù)防組肝臟顏色較脂肪肝組淺，但比對(duì)照組深。光鏡下觀察，①脂肪肝組：肝細(xì)胞腫脹、氣球樣

5、變，點(diǎn)狀肝細(xì)胞壞死，呈酒精小體，肝竇略顯狹窄，肝細(xì)胞脂肪變性以肝腺泡3區(qū)明顯，匯管區(qū)可見(jiàn)淋巴、單核細(xì)胞浸潤(rùn)；②預(yù)防組：鏡下觀察，與脂肪肝組肝細(xì)胞相比腫脹程度減輕，氣球樣變少，酒精小體較脂肪肝組少，肝細(xì)胞脂肪變較脂肪肝組輕；③對(duì)照組：大鼠肝小葉完整，輪廓清晰，肝細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀，肝竇清晰可見(jiàn)，肝索排列整齊，肝小葉匯管區(qū)基本結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05）。免疫組化檢測(cè)CYP2E1蛋白表達(dá)①脂肪肝組：棕黃

6、色顆粒表達(dá)明顯增多，且分布呈一定規(guī)律性，多集中在肝腺泡3區(qū)，門(mén)靜脈周?chē)騦、2區(qū)擴(kuò)展，與脂肪變分布一致；②預(yù)防組，肝組織CYP2El表達(dá)水平介于對(duì)照組與脂肪肝兩組CYP2El表達(dá)水平之間；③對(duì)照組：CYP2El表達(dá)僅見(jiàn)于中央靜脈周?chē)鷧^(qū)，主要表達(dá)于肝腺泡3區(qū)，肝細(xì)胞膜及漿均可見(jiàn)其表達(dá)。應(yīng)用image proplus6.0免疫組化圖像分析系統(tǒng)對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝組織中CYP2El的表達(dá)進(jìn)行灰度值分析，脂肪肝組，預(yù)防組較對(duì)照組，CYP2El表

7、達(dá)均明顯增多，（P<0.05）；脂肪肝組較預(yù)防組，CYP2E1表達(dá)增多，(P<0.05)；應(yīng)用捷達(dá)801凝膠圖像分析系統(tǒng)，對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝組織中的CYP2E1mRNA的表達(dá)進(jìn)行灰度值分析，脂肪肝組，預(yù)防組較對(duì)照組，CYP2El m RNA的表達(dá)均明顯增多，（P<0.05）；脂肪肝組較預(yù)防組，CYP2Elm RNA的表達(dá)增多，(P<0.O5).(r=0.855，P<0.01).
　　 結(jié)論通過(guò)給大鼠連續(xù)灌服酒精導(dǎo)致大鼠肝組織脂

8、肪性病變，經(jīng)肝組織病理學(xué)變化及肝影像學(xué)檢測(cè)表明本實(shí)驗(yàn)酒精性脂肪肝大鼠動(dòng)物模型建立成功。酒精性脂肪肝的發(fā)生與CYP2E1的增高成正比，且CYP2El參與了酒精性脂肪肝的發(fā)生和發(fā)展。CYP2El參與了酒精性脂肪肝的發(fā)牛和發(fā)展，其表達(dá)的上調(diào)與酒精性脂肪肝的發(fā)生成正比；美他多辛可以通過(guò)有效的抑制CYP2El mRNA基因的表達(dá)的上調(diào)，降低CYP2El的表達(dá)水平，影響酒精性脂肪肝的發(fā)生和發(fā)展，從而有效的預(yù)防酒精性脂肪肝的發(fā)生，并對(duì)酒精性脂肪肝的發(fā)