腦脈通聯(lián)合溶栓對腦缺血大鼠微血管基底膜損傷和神經細胞凋亡的影響.pdf

1、本研究采用血栓性大鼠腦缺血模型，研究溶栓與腦脈通聯(lián)合治療對大鼠腦缺血的影響，并進一步探討腦脈通的保護機制。為臨床開展溶栓治療奠定理論基礎。 研究目的：①從神經功能缺損和病理學方面，評價溶栓療法聯(lián)合中藥復方腦脈通顆粒治療急性血栓性腦梗死的療效優(yōu)勢，即增強療效、降低溶栓藥物導致的腦水腫和出血延長治療時間窗等，為臨床應用提供科學依據。②從腦微血管結構、血管基底膜明膠酶系統(tǒng)和纖溶酶系統(tǒng)的變化，揭示溶栓療法聯(lián)合中藥復方腦脈通顆粒治療急性血

2、栓性腦梗死時對腦微血管損傷的保護作用及機制。③從神經細胞凋亡及其與凋亡相關基因蛋白表達等的變化，闡明溶栓療法聯(lián)合中藥復方腦脈通顆粒治療急性血栓性腦梗死時對神經細胞的保護作用及其機制。 研究方法：自體血栓法制作大鼠局灶性腦缺血模型，假手術做對照組，分別于腦缺血3、6、9h溶栓治療，每個缺血時間又分為模型組、尿激酶溶栓組、腦脈通組、聯(lián)合用藥組(尿激酶聯(lián)合腦脈通組)。各組動物造模前4天灌胃，假手術組、模型組、尿激酶組以等體積生理鹽水灌

3、胃。灌胃第5天參考改良的Zhang法應用自體血栓結合線栓制備血栓栓塞性大鼠大腦中動脈阻塞模型，造模成功后在各時間點區(qū)域動脈經導管給藥，其中模型組3、6、9h經導管給予生理鹽水，尿激酶組區(qū)域動脈經導管給予尿激酶，腦脈通為灌胃用藥，聯(lián)合用藥組中尿激酶區(qū)域動脈經導管給藥，所聯(lián)合的腦脈通為灌胃用藥。溶栓治療24h后取材，應用光鏡、電鏡和圖像分析系統(tǒng)觀察腦組織學和超微結構的變化，評定神經癥狀、測定腦組織含水量、腦組織梗死面積，裸眼觀察顱內出血轉化

4、率。應用免疫組織化學技術檢測腦缺血不同時間不同組別Ⅳ型膠原、層連蛋白、免疫球蛋白G、TUNEL、bcl-2、bax和Caspase-3蛋白表達的相對含量的動態(tài)變化。 研究結果：①模型組隨缺血時間延長神經評分、梗塞面積、含水量依次增加，較假手術組有統(tǒng)計學差異。各用藥組較模型組腦損傷程度減輕：表現(xiàn)在神經評分降低，梗塞面積減小，含水量降低。缺血3h尿激酶組效果尤為顯著；缺血時間延長至9h，聯(lián)合用藥組效果較尿激酶組好。光鏡下，各組缺血3

5、h可見少量神經細胞缺血變性和輕微神經細胞腫脹；缺血6h變性的神經細胞數(shù)量增多，腦組織水腫范圍擴大，并累及額頂葉皮質；缺血9h可見大量神經細胞缺血變性和明顯的神經細胞腫脹。TUNEL陽性細胞及電鏡結果顯示缺血3h細胞凋亡開始增多；缺血6h細胞凋亡較3h增多；缺血9h細胞凋亡數(shù)目較6h顯著增多。電鏡下檢測到大量前凋亡神經細胞，其時間變化與TUNEL結果一致。假手術組大鼠神經功能、病理所見和TUNEL檢測均未見明顯的異常變化，缺血3h各用藥組

6、以尿激酶組腦保護作用最明顯，缺血6、9h以聯(lián)合用藥組腦保護作用最明顯。裸眼觀察顱內出血轉化率：尿激酶組顱內出血率較模型組和腦脈通組明顯增高，聯(lián)合用藥組較尿激酶組明顯降低。②IgG表達變化：模型組及各用藥組3、6h免疫球蛋白G表達均較假手術組無顯著差異，模型組及各用藥組9h均較假手術組顯著增多，各用藥組9hIgG表達較模型組減少，以聯(lián)合用藥組效果最明顯。③Ⅳ型膠原、層連蛋白表達變化：模型組3、6、9h隨時間延長二者表達減少，均較假手術組有

7、顯著意義；各用藥組較模型組表達增多，缺血3h以尿激酶組效果明顯，缺血6、9h以聯(lián)合用藥組效果明顯。④bcl-2表達的動態(tài)變化：模型組較假手術組顯著降低，3h、6h、9h表達逐漸減少；各用藥組較模型組bcl-2蛋白表達增多，但未恢復到假手術組水平，缺血3h以尿激酶組作用明顯，6、9h以聯(lián)合用藥組作用明顯。⑤bax和Caspase-3蛋白表達變化：模型組較假手術組顯著增高，3h、6h、9h表達逐漸增高；各用藥組較模型組表達減少，但未恢復到假

8、手術組水平，缺血3h以尿激酶組作用明顯，6、9h以聯(lián)合用藥組作用明顯。 研究結論：①自體血栓栓塞MCAO模型操作技術穩(wěn)定，重復性好，為評價溶栓藥物的治療提供了一個較為理想的動物模型。②神經評分、梗塞面積、腦組織含水量是評價腦缺血后腦損傷的有效指標，單純尿激酶溶栓以缺血3h效果明顯，腦脈通聯(lián)合溶栓在缺血9h明顯較單純尿激酶溶栓效果好，為擴大溶栓治療時間窗提供了可能。③大鼠腦缺血損傷與血腦屏障微血管基底膜成分(Ⅳ型膠原和層連蛋白)降