曲美他嗪對大鼠腦缺血再灌注神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：本研究采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，觀察曲美他嗪(Trimetazidine，TMZ)對神經(jīng)細(xì)胞凋亡、Bcl．2、Caspase．3蛋白表達(dá)的影響。 方法：采用ZeaLonga提出的血管內(nèi)線栓閉塞法(線栓法)制備大鼠局灶性腦缺血2h后再灌注模型。分組：假手術(shù)(Sh鋤)組、腦缺血再灌注(ischemiarepefusion，IR)組、曲美他嗪(Trimetazidine，TMZ)組，IR組和TMZ組分為再灌注3h、6h、1

2、2h、24h、48h亞組。在再灌注不同時間點(diǎn)處死大鼠，采集所需標(biāo)本分別采用HE染色觀察腦組織病理學(xué)改變，采用TUNEL法檢測凋亡細(xì)胞分布，免疫組化方法檢測Bcl．2、Caspase．3蛋白的表達(dá)水平，并觀察TMZ對局灶性腦缺血再灌注后腦組織中細(xì)胞凋亡和Bcl．2、Caspase．3蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：1．腦組織病理學(xué)變化：IR組缺血側(cè)腦組織可見不同程度的腫脹、蒼白。HE染色顯示缺血中心區(qū)神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞等正常組織結(jié)構(gòu)消失、胞

3、核碎裂、溶解等壞死形態(tài)學(xué)改變。缺血半暗帶神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量減少，體積縮小，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)濃縮、邊集，甚至形成核碎片等細(xì)胞凋亡的特征。 2．TUNEL法檢測結(jié)果：陽性細(xì)胞核染色呈棕黃色。Sham組，僅有零星凋亡細(xì)胞分布，IR組缺血中心區(qū)和半暗帶均有凋亡細(xì)胞分布。再灌注3h時，紋狀體水腫區(qū)可見少量凋亡細(xì)胞；12～24h紋狀體區(qū)邊緣出現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞，皮層亦出現(xiàn)了凋亡細(xì)胞；48h凋亡細(xì)胞在皮層明顯增

4、多(P<0．01)，且波及到皮層外緣。而TMZ組在各再灌注時間點(diǎn)凋亡細(xì)胞顯著減少(P

5、，IR組Caspase．3蛋白表達(dá)于再灌注3h開始升高(P<0．05)，24h達(dá)高峰，持續(xù)到48h，其表達(dá)的空間分布與TUNEEL結(jié)果一致，但其表達(dá)升高早于細(xì)胞凋亡數(shù)量的增加。TMZ組再灌注3hCaspase-3表達(dá)很低與Sham組比較無顯著性差異(P>O．05)；再灌注6～24hCaspaase-3表達(dá)亦有增強(qiáng)，于48h表達(dá)下降；相同時間點(diǎn)Caspase．3表達(dá)TMZ組比IR組顯著減弱(P

6、鼠MCA成功制備局灶性腦缺血再灌注模型。 2．腦缺血再灌注損傷中神經(jīng)細(xì)胞凋亡扮演了重要角色，隨再灌注時間延長凋亡細(xì)胞比例逐漸增加，再灌注48h達(dá)高峰。細(xì)胞凋亡涉及Caspase-3和Bcl．2的激活。Caspase．3表達(dá)的升高早于細(xì)胞凋亡，直接參與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的執(zhí)行過程。Bcl．2在再灌注早期表達(dá)明顯升高，具有神經(jīng)保護(hù)作用，再灌注后期其保護(hù)作用不足以對抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 3．TMZ能降低缺血再灌注損傷中神經(jīng)細(xì)胞凋亡比例，