腦脈通聯(lián)合骨髓間充質干細胞移植對腦缺血再灌注大鼠腦微血管再生的影響.pdf

1、目的：從腦缺血再灌注損傷后不同時間點大鼠神經(jīng)功能、腦組織含水量、腦梗死面積、腦組織病理改變和腦微血管再生方面，評價腦脈通、骨髓MSCs移植及其聯(lián)合應用對腦缺血損傷的保護作用，并進一步從VEGF、VEGFR-2、bFGF表達的動態(tài)變化方面，揭示其促微血管再生的作用機制。 方法：SD大鼠，195只，3～4月齡。第一次根據(jù)處理因素隨機分為假手術組和手術組，手術組包括模型組、腦脈通組、MSCs移植組(簡稱移植組)、腦脈通聯(lián)合MSCs移植

2、組(簡稱聯(lián)合組)；第二次對手術組根據(jù)取材時間點不同隨機分為7d、14d、28d組。腦脈通組和聯(lián)合組術前4天給予腦脈通灌胃，假手術組、模型組和移植組以同等體積的生理鹽水灌胃，每天1次。參照改良的Longa法線栓阻塞大腦中動脈制備局灶性腦缺血再灌注動物模型。移植組和聯(lián)合組分別于缺血3h再灌注后24h經(jīng)缺血側頸內動脈給予Brdu標記的MSCs懸浮液200ul(細胞數(shù)為2×10<'6>個)，模型組和腦脈通組給予同等體積的生理鹽水。大鼠在各取材時

3、間點進行神經(jīng)功能評分，檢測腦組織含水量、腦梗死面積；光鏡下觀察缺血區(qū)病理變化，電鏡技術觀察神經(jīng)元、微血管及EC的變化。采用免疫組織化學染色法檢測腦組織中CD31<'+>細胞、VEGF、VEGFR-2、bFGF表達的變化；免疫組化雙標法觀察Brdu/FⅧ雙標細胞數(shù)量與FⅧ(血管內皮細胞)分化率。 結果：①各組神經(jīng)功能評分、腦組織含水量、梗塞面積及腦組織病理變化：模型組7d、14d、28d較假手術組神經(jīng)評分降低、腦組織含水量增加、腦

4、梗塞面積增大；腦脈通和聯(lián)合組7d、14d、28d分別較模型組神經(jīng)評分增高、腦組織含水量降低、梗塞面積減小，移植組28d較模型組神經(jīng)評分增高、腦組織含水量降低；聯(lián)合組28d分別較腦脈通和移植組神經(jīng)評分增高、腦組織含水量降低，聯(lián)合組7d和14d腦組織含水量較移植組降低，聯(lián)合組7d和28d梗塞面積較移植組減?。灰浦步M7d較腦脈通組神經(jīng)評分降低、腦組織含水量增加、腦梗塞面積增大。手術組出現(xiàn)不同程度的病理損傷、毛細血管增多和EC超微結構改變。②腦

5、組織Brdu/FⅧ雙標細胞數(shù)量與FⅧ(血管內皮細胞)分化率的變化：聯(lián)合組14d Brdu標記細胞的數(shù)量明顯多于移植組；聯(lián)合組7d較移植組Brdu/FⅧ標細胞增多、Brdu標記細胞分化為EC的比率增高。⑧各組大鼠腦組織內CD31<'+>細胞表達的變化：模型組7d、14d、28d較假手術組表達增強；腦脈通、移植和聯(lián)合組7d、14d、28d分別較模型組表達增強；聯(lián)合組7d較移植組顯著增強，聯(lián)合組28d較腦脈通組增強；腦脈通組7d較移植組顯著增

6、強。④各組大鼠腦組織內VEGF、VEGFR-2、bFGF表達的動態(tài)變化：模型組7d、14d、28d VEGF表達較假手術組增強；腦脈通組7d和14d較模型組增強，移植組14d較模型組增強，聯(lián)合組7d和28d較模型組增強；聯(lián)合組7d和28d較移植組增強，聯(lián)合組28d較腦脈通組增強；腦脈通組7d較移植組顯著增強。模型組7d、14d、28d VEGFR2表達較假手術組增強；聯(lián)合組7d、14d、28d較模型組增強，腦脈通組7d和28d較模型組增

7、強，移植組28d較模型組增強；聯(lián)合組28d較腦脈通組增強，聯(lián)合組7d和14d較移植組增強；腦脈通組7d較移植組顯著增強。模型組7d和14d bFGF表達較假手術組增強；腦脈通和聯(lián)合組7d、14d、28d分別較模型組增強，移植組14d和28d較模型組增強：聯(lián)合組7d較移植組增強，聯(lián)合組28d較腦脈通組增強；移植組7d較腦脈通組顯著降低，移植組14d和28d較腦脈通組增強。 結論：①腦脈通、MSCs移植及其聯(lián)合應用有明顯的抗腦缺血損