食管鱗癌缺失基因的識別及鑒定.pdf

1、食管癌是世界十大惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展涉及了一系列基因的改變。食管鱗癌中13號染色體經(jīng)常發(fā)生雜合性丟失，已經(jīng)鑒定了一些位于13q11-q14的丟失區(qū)段，但未發(fā)現(xiàn)其中有涉及食管癌發(fā)生發(fā)展的重要基因。 本研究選擇13q21.3-qter區(qū)域的25個微衛(wèi)星標記進行LOH研究，尋找食管癌較高頻率的丟失區(qū)段，并以此為線索鑒定食管鱗癌缺失的基因，為闡明食管癌變機制提供科學依據(jù)。結(jié)果顯示：8個微衛(wèi)星位點D13S170、D13S122、D13

2、S1494、D13S1323、D13S248、D13S1315、D13S285和D13S1295在食管癌存在至少45％的雜合性丟失頻率，在13q33-q34范圍內(nèi)存在一個大小約6.36Mb(D13S1311～D13S285)的高頻率重疊缺失區(qū)。通過對食管鱗癌細胞系的分析進一步證明了這一高頻率重疊缺失區(qū)的存在。與此同時，還發(fā)現(xiàn)D13S248在G2期腫瘤中發(fā)生LOH的頻率顯著高于G1期腫瘤，該位點附近的基因可能與腫瘤分化有關。D13S152

3、在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤中發(fā)生LOH的頻率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤，該位點附近的基因可能參與食管鱗癌的進展。 進一步研究發(fā)現(xiàn)定位于13q33-q34高頻率重疊缺失區(qū)D13S248和D13S1315之間的TNFSF13B在77.8％的食管鱗癌中表達下調(diào)，并且至少25％的表達下調(diào)是由于TNFSF13B位點的LOH造成的，而且在40％的食管鱗癌細胞系中檢測到了TNFSF13B基因內(nèi)純合缺失。 鑒于13q33-q34著絲粒端的D13S

4、1494和D13S1323存在高頻率的LOH，我們進一步分析了這兩個位點間的基因zizimin1狀態(tài)。D13S770是位于zizimin1第一內(nèi)含子中的多態(tài)分子標記，分析發(fā)現(xiàn)D13S770在62.7％的食管鱗癌中存在LOH，但是較少與zizimin1兩側(cè)的D13S1494和D13S1323同時丟失。檢測zizimin1表達和D13S770丟失的關系，發(fā)現(xiàn)72.7％(24/33)的腫瘤表達下調(diào)，LOH對zizimin1表達下調(diào)的貢獻達41

5、.7％。此外，去甲基化試劑可以恢復食管鱗癌EC9706細胞系zizimin1mRNA表達，表明啟動子CpG島高甲基化也是食管鱗癌zizimin1表達下調(diào)的原因之一。對zizimin1調(diào)控Cdc42活性的關鍵CZH-2結(jié)構域進行突變分析，發(fā)現(xiàn)了兩個SNP位點，但是未檢測到導致氨基酸改變的突變。然而在一例腫瘤中，這兩個SNP位點均表現(xiàn)LOH，進一步證實zizimin1本身存在等位丟失。 綜上所述，本研究在13q21.3-qter范圍