攜HBV PreS1重組腺病毒基因治療載體對肝細胞嗜向性的研究.pdf

1、目的:擴增純化鑒定重組腺病毒基因治療載體rAd-preS1，體外多種細胞實驗檢測其對肝細胞的嗜向性。
　　方法:同源重組法構建了含HBV嗜肝性基因PreS1的重組腺病毒質(zhì)粒prAd-PreS1，酶切鑒定后293細胞包裝生成腺病毒rAd-preS1。聚合酶鏈反應PCR檢測目的基因片段Pres1。經(jīng)反復感染293細胞擴增獲得較高滴度重組腺病毒，氯化銫經(jīng)典法純化病毒。用rAd-preS1體外分別感染人正常肝細胞(L02)、人肺癌細胞(A

2、549)、人喉癌細胞（Hep2）檢測其肝嗜向性，同時野生腺病毒rAd作為對照，觀察各細胞中熒光蛋白GFP表達情況，比較各細胞內(nèi)的病毒滴度值，同時用流式細胞術檢測各細胞重組腺病毒的感染率，并進行統(tǒng)計學分析。
　　結果:酶切鑒定證實rAd-preS1載體構建成功，擴增后病毒滴度1.15×109efu/ml。PCR結果示大小750bp目的基因片段。rAd-preS1轉染多種細胞示L02細胞中綠色熒光蛋白表達明顯強于A549、Hep2細胞

3、，L02細胞的病毒滴度值高于A549、Hep2，有顯著差異（P值均＜0.01），而A549、Hep2細胞間表達差異無統(tǒng)計學意義（P值＞0.05）;對照組各細胞間表達差異無統(tǒng)計學意義（P值＞0.05）。流式細胞術結果示人肝細胞感染率顯著高于非肝細胞組。
　　結論:攜HBV PreS1重組腺病毒載體rAd-preS1對人肝細胞相對較強嗜向性，而對非肝細胞無明顯效果，野生腺病毒無明顯細胞嗜向性，為進一步研究肝臟疾病靶向基因治療奠定了基礎