末端修飾的PAMAM非病毒基因治療載體的研究.pdf

1、在基因治療的過程中,基因載體有著極其重要的作用.對于常用的陽離子聚合物/質(zhì)粒DNA非病毒基因治療載體來講,其與質(zhì)粒DNA之間的相互作用包括靜電,疏水等.而在基因傳遞的過程中,疏水作用究竟起一個什么樣的作用是一個受到重視的問題.本文研究的主要內(nèi)容有: 首先,本文參考文獻,在液相中對PAMAM(polyamidoamine)進行了表面修飾,為了體現(xiàn)疏水性的作用,我們選擇了帶有苯環(huán)的苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)作為表面修飾物.

2、核磁共振檢測證明了PAMAM表面連接了足夠的氨基酸殘基,生成了表面既有氨基(在水溶液中會帶正電荷)又有大量疏水基的PAMAM氨基酸修飾物. 采用了質(zhì)粒提取試劑盒,色譜法和聚乙二醇法提取了得到實驗所需的質(zhì)粒,并利用電泳和紫外吸收來檢測了質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度,使之能夠用于后續(xù)的實驗. 為了考查新聚合物和質(zhì)粒形成的復合物的自聚過程,瓊脂糖凝膠電泳,溴乙錠熒光發(fā)射,多角度激光散射和透射電鏡從不同的方面顯示了聚合物和質(zhì)粒DNA之間的作

3、用和質(zhì)粒的縮合. 聚合物對于動物細胞的毒性實驗和轉(zhuǎn)染效率實驗反應了新聚合物的生物毒性和最終的轉(zhuǎn)染效率.在低的濃度下,聚合物有相對較弱的毒性,在電荷比例為5的時候,修飾Phe和Trp的聚合物能夠大大提高綠色熒光蛋白在非洲綠猿腎細胞中的表達效率. 最終說明,含疏水基的氨基酸在PAMAM表面的引入,改變了PAMAM和質(zhì)粒DNA之間的自聚過程,并最終提高了細胞轉(zhuǎn)染的效率,說明了疏水作用在基因傳遞系統(tǒng)中的重要作用,為陽離子聚合物基