小劑量胰島素局部應用對移植真皮替代物血管化過程的影響.pdf

1、目的觀察小劑量胰島素局部應用對真皮替代物移植后血管化過程的影響。 方法 1.豬脫細胞真皮基質(swineacellulardermalmatrixsADM)制備。 以脊柱為中心取皮，1∶1000新潔爾滅浸泡20分鐘消毒后，10×10cm2規(guī)格、厚為0.5mm的斷層皮片。然后用10％氯化鈉溶液37℃恒溫下作用24-48小時，吸處鹽液，輕輕撕去表皮，5％碳酸氫鈉浸泡30分鐘，再用0.25％胰蛋白酶加0.1％EDTA3

2、7℃恒溫下浸泡90分鐘，無菌生理鹽水沖洗干凈后，網(wǎng)狀植皮機制成網(wǎng)狀，置2-8℃條件下保存待用。 2.將144只大鼠按sADM下浸潤注射不同濃度胰島素，設為0.1U(A)、0.05U(B)、0.01U(C)組和(D)等滲鹽水組作為對照。隔日注射，至術后第13d止。于埋植后1、2、3、4、7、10、14、21、28d取真皮替代物組織活檢，HE及免疫組織化學染色觀察移植物血管化過程，并測定血糖濃度的變化。 結果 1.血

3、糖濃度的變化： B、C、D組注射胰島素后6h血糖波動在4.0-8.40mmol/L與術前無顯著性差異(P＞0.05)，A組注射后1h血糖明顯降低(P＜0.01)。 2.真皮基質移植后大體觀察及組織學觀察 2.1大體觀察 術后各時間點取材見真皮基質與創(chuàng)面接觸緊密。第14天取材，實驗組見包裹真皮基質的筋膜層有豐富的血管網(wǎng)，密度大于對照組。 2.2組織學觀察 移植前隨機取部分sADMHE染色未見

4、任何細胞成分。術后第2d在A、B組移植片雙面淺層可見成纖維細胞及炎性細胞浸潤。第4dA、B組移植片內血管內皮細胞數(shù)多于C、D組(P＜0.05)。第7dA、B組移植片雙面淺層可見新生血管形成，結構完整。第14dA組和B組血管數(shù)量和管徑明顯大于C組和D組(P＜0.05)。第28d各組間血管數(shù)和管徑無明顯差異。 討論 皮膚替代物的血管生成是在血管內皮細胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，

5、VEGF)的作用下，與創(chuàng)面上血管內皮細胞上VEGF受體結合后，引起內皮細胞分裂、增殖和遷移，增加血管通透性，促進新生血管形成。血管內皮細胞又與成纖維細胞相互作用來進一步完成血管化過程。胰島素可以通過多種不同的信號途徑誘導VEGFmRNA表達，促進血管內皮細胞的增殖。并且胰島素對成纖維細胞的生長和膠原合成也有促進作用，維持成纖維細胞活性。故對血管內皮細胞和成纖維細胞都存在作用的胰島素就成為了我們研究的對象。為此我們設計了將sADM先植入機

6、體內，而局部浸潤注射胰島素，利用胰島素促進細胞分裂增殖、VEGF表達的作用，來促進局部成纖維細胞和血管內皮細胞在機體組織提供的三維環(huán)境中快速分裂增殖。而研究結果表明應用小劑量胰島素可以明顯有效地促進局部的成纖維細胞的增殖，并且向真皮基質內浸潤。這樣不但植入的真皮基質具有了“活性”，而且使血管內皮細胞在VEGF的作用下更加快速地在真皮基質內增殖。成纖維細胞還可分泌多種細胞因子、生長因子和細胞外基質成分，從而增強真皮替代物的親和性，促進血管