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文檔簡介
1、背景:新生兒窒息、心腦血管意外等是發(fā)生于臨床的常見疾病,其病理生理改變均為缺氧復氧(缺血再灌注)損傷,因此缺氧復氧損傷機制和防治研究長期受到醫(yī)學研究者的關注。 目前對缺氧缺血損傷防治研究依然受到以下條件的限制:①已經(jīng)建立并廣泛使用的新生動物模型不能完全模擬臨床新生兒窒息的改變;②雖然缺氧/缺血預處理是目前公認的最有效防治缺氧/缺血損傷的方法,由于安全性、有效性、可行性仍存在爭議,因此不能應用于臨床。③缺氧/缺血預處理保護機制并不
2、清楚。 自然分娩過程中,宮縮使子宮壁間血管閉合,導致胎兒反復短時間缺氧,與缺氧預處理具有明顯的相似性,自然分娩新生兒抗缺氧能力也強于剖宮產(chǎn),提示:①宮縮具有缺氧預處理保護作用;②模擬宮縮對動物進行預處理可能兼有安全、有效的特點。 目的:①以新西蘭兔建立與臨床類似的新生兒窒息模型;②比較不同方式分娩的新生兔的缺氧耐受能力,并研究分娩宮縮的缺氧預處理保護機制;③模擬宮縮造成胎兒間斷缺氧的特點對成年兔實施預處理(即仿宮縮預處理
3、),研究這種仿生理的動物全身缺氧預處理的安全性、有效性及可能機制。 方法:將空氧混合儀改為空/氮混合儀,以取得0~21%之間任意需要的氧濃度,用于以下實驗:①新生兒窒息模型的建立:將新生兔放入透明密閉容器,持續(xù)輸入4%氧氣中30分鐘,休息1小時后取心、肺、腦、肝、腎做病理切片;②自然分娩對新生兔的保護作用:將孕兔分為自然分娩組和剖宮產(chǎn)組,利用已建立的新生兒窒息模型對不同方式分娩的新生兔進行缺氧損傷處理,觀察缺氧過程中動物行為學變
4、化,心、肺、腦、肝、腎的光鏡下病理改變,大腦C-fos蛋白的表達等;③仿宮縮預處理對成年兔的保護作用:將成年新西蘭兔分為C組(對照組,鎮(zhèn)靜后不實施預處理)、TP組(傳統(tǒng)預處理組,缺氧濃度為7%,持續(xù)36秒,復氧3.3分,重復3小時)和MLPC組(仿宮縮預處理組,8%氧30秒,空氣復氧4.5分→7%氧35秒,空氣復氧3.5分→6%氧40秒,空氣復氧2.5分,每濃度梯度持續(xù)處理1小時,共3小時)。將處理后的三組動物以5%的氧通氣15分鐘,使
5、之產(chǎn)生缺氧復氧損傷。監(jiān)測處理前后生命、血氣變化,并以Elisa法測定血漿NO濃度。實驗結(jié)束后處死動物,HE染色觀察各器官病理改變,免疫組化法測定大腦C-fos蛋白的表達,RT-PCR法測定肺泡活性蛋白Sp-A、Sp-B的mRNA轉(zhuǎn)錄。 結(jié)果: ①以4%氧氣30分鐘能夠使新生兔產(chǎn)生行為異常和腦、肺、心、肝、腎等器官的損傷,特征與臨床新生兒窒息十分相似。 ②兩組動物經(jīng)歷4%氧氣30分鐘后,病理切片顯示各器官均有損傷,
6、但自然分娩組較剖宮產(chǎn)組輕;出生即刻自然分娩組C-fos陽性細胞率明顯高于剖宮產(chǎn)組(10.20±2.44vs 6.1±1.52,P<0.05),而缺氧復氧損傷后,自然分娩組明顯低于剖宮產(chǎn)組(14.5±1.51 vs 20.1±2.96.P<0.05)。 ③仿宮縮預處理對成年兔的影響:預處理期:與TP組比較,MLPC組動物生命體征平穩(wěn),血液pH、BE穩(wěn)定,組織攝氧量下降、血漿NO升高。缺氧期:以5%氧氣缺氧15分鐘,C組1只、TP
7、組2只、MLPC組1只死亡,但無統(tǒng)計學差異;三組動物的pH、PaC02、Sa02和Pa02均顯著低于其它時間點(P<0.05),組間比較:MLPC組動物Pa02、Sa02、血漿NO濃度、攝氧量高于C組和TP組。復氧1小時后:除C組外,其它兩組動物血液pH、BE均恢復正常;MLPC組和TP組PaO2、攝氧量、組織含水量均低于C組,MLPC組最低,組織病理切片也顯示,MLPC組損傷最輕;RT-PCR顯示,MLPC組Sp-A、Sp-B的mRN
8、A顯著高于C組和TP組(p<0.05),血漿NO濃度也高于C組和TP組,但無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論: ①以4%氧氣使新生兔缺氧30分鐘后,所建立的模型在病因、病生、病理改變等方面與臨床新生兒窒息十分相似。 ②分娩宮縮能誘導即刻早期基因如c-fos的少量表達,從而啟動內(nèi)源性保護機制,在發(fā)生相同程度缺氧時,能減輕各器官的損傷,抑制c-fos蛋白的過度表達。 ③模擬宮縮對成年兔實施預處理能誘導出確切的保護作用。與傳
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