金黃色葡萄球菌B型腸毒素單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用研究.pdf

1、目的制備金黃色葡萄球菌B型腸毒素(staphylococcus aureusenterotoxin B,SEB)的單克隆抗體(Monoclonal antibody,McAb),建立檢測(cè)金葡菌B型腸毒素的ELISA檢測(cè)方法,并進(jìn)行初步的臨床應(yīng)用.方法以天然純化的SEB免疫BALB/C小鼠,采用細(xì)胞雜交瘤技術(shù),篩選出抗SEB的McAb,在此基礎(chǔ)上建立雙抗體夾心ELISA方法,用標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離株進(jìn)行評(píng)價(jià),并初步應(yīng)用于燒傷病人血清中SEB

2、的檢測(cè).結(jié)果制備了抗SEB-McAb共六株,其中1C<,8>、1A<,5>、1D<,1>、3D<,6>分泌的McAb類型為Ig G1,2C<,11>、3A<,9>分泌的McAb類型為Ig G2a.6株中有4株僅與SEB發(fā)生反應(yīng),有兩株與SEC<,1>有弱交叉反應(yīng),與大腸埃希菌、糞腸球菌、綠膿假單胞菌、腐生葡萄球菌均不發(fā)生反應(yīng).同時(shí)制備了抗SEB多克隆抗體1株.SEB-McAb誘導(dǎo)小鼠腹水純化后效價(jià)為1:12800-1:25600,抗體親

3、和力常數(shù)為5×10<'7>~2×10<'9>.Western-blot實(shí)驗(yàn)顯示出一條特異性條帶,位于分子量28.5KDa處,證明了其特異性.用特異McAb建立了雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)SEB,其敏感性高,達(dá)0.078 u g/L,高于目前國(guó)內(nèi)報(bào)道的水平.特異性強(qiáng),重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好.雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)臨床分離金葡菌腸毒素結(jié)果顯示,耐甲氧西林金葡菌(MRSA)中腸毒素的總帶毒率為93.9％,其中B型腸毒素帶毒率最高,占檢出的

4、53.3%,其次為C型(28.5%).甲氧西林敏感金葡菌的帶毒率僅為28.6%,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.重度燒傷病人血清中SEB水平明顯高于對(duì)照組及輕度燒傷組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論制備了抗SEB-McAb,其效價(jià)較高,親和力較強(qiáng),特異性強(qiáng).在此基礎(chǔ)上建立雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)SEB,靈敏性達(dá)0.078 u g/L,特異性和重復(fù)性均較好,可用于臨床分離菌株SEB的檢測(cè)以及檢測(cè)燒傷病人血清中的SEB.該方法為臨床金葡菌感染的診斷和分