血管生成素在大鼠進(jìn)行性腎小球硬化中的作用研究.pdf

1、第一部分血管生成素在柔紅霉素誘導(dǎo)大鼠腎病中的變化及意義 目的探討柔紅霉素誘導(dǎo)大鼠腎病過(guò)程中，內(nèi)源性血管生成素的異常變化及其病理作用。 方法70只健康雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組30只，柔紅霉素(Daunorubicin，DRB)組40只，DRB組大鼠，從尾靜脈按15mg·kg-1注射柔紅霉素，分別于注藥后的第1、2、4、6、8、12周，隨機(jī)取各組大鼠5只，收集24小時(shí)尿量，采血取腎，檢測(cè)24h尿蛋白定量(24

2、hUPQM)、血漿Angiopoietinl(Ang1)、Angiopoietin2(Ang2)和TNF-α，用PAS染色、免疫組化、原位雜交和透射電鏡技術(shù)對(duì)鼠腎進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)分析。 結(jié)果從第2周至第12周，DRB組與Control組在相同時(shí)間點(diǎn)上比較，24hUPQM顯著增高。從第1周至第12周，DRB組與Control組的血漿Ang1水平無(wú)顯著性差異。從第4周至第8周，在相同時(shí)間點(diǎn)上DRB組的血漿Ang2水平顯著高于Contr

3、ol組。從第2周至第12周，DRB組的血漿TNF-α水平顯著高于相同時(shí)間點(diǎn)的Control組。而且，隨著病變的進(jìn)展，腎小球Ang1mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，Ang2mRNA、Ang2蛋白、TNF-α蛋白和Fn蛋白表達(dá)上調(diào)。DRB組的腎小球內(nèi)Ang1mRNA和蛋白表達(dá)分別與24hUPQM呈負(fù)相關(guān)；血漿Ang2、腎小球Ang2mRNA和蛋白表達(dá)分別與24hUPQM呈正相關(guān)；血漿TNF-α濃度和腎小球局部的TNF-α蛋白表達(dá)分別與腎小球Ang2

4、mRNA和蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。腎小球內(nèi)的Ang2蛋白表達(dá)與Fn蛋白表達(dá)、腎小球細(xì)胞外基質(zhì)相對(duì)面積(MAECM)呈正相關(guān)。 結(jié)論柔紅霉素誘導(dǎo)大鼠腎病過(guò)程中，腎小球局部的Ang1表達(dá)減少，Ang2的表達(dá)上調(diào)。血漿的Ang2濃度升高和腎小球內(nèi)的Ang2表達(dá)上調(diào)，可能共同介導(dǎo)了腎小球?yàn)V過(guò)膜通透性的增高，腎小球局部的Ang2可能還通過(guò)上調(diào)細(xì)胞外基質(zhì)成分的表達(dá)促進(jìn)腎小球硬化的形成。 第二部分血管生成素在大鼠足細(xì)胞損害誘導(dǎo)腎小球硬化中的

5、異常表達(dá)及意義 一、足細(xì)胞損害后血管生成素的表達(dá)變化與腎小球硬化的關(guān)系 目的探討足細(xì)胞損害后內(nèi)源性血管生成素的異常表達(dá)與進(jìn)行性腎小球硬化的關(guān)系及其病理作用。 方法使用單側(cè)腎切除并2次注射柔紅霉素的方法，誘導(dǎo)足細(xì)胞損害，100只健康雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組30只、單側(cè)腎切除(Uninephrectomy，UPHT)組30只和單側(cè)腎切除+柔紅霉素(DRB)組40只，DRB組大鼠，摘除左腎后的

6、第7、14天，從尾靜脈注射柔紅霉素5mg·kg-1各1次。然后，分別于造模后的第1、2、4、6、8周，從各組大鼠中隨機(jī)取出6只，收集24小時(shí)尿量，采血取腎，檢測(cè)24h尿蛋白定量(24hUPQM)、血肌酐(Scr)和尿素氮(Bun)，用PAS染色、免疫組化、原位雜交和透射電鏡技術(shù)進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)分析。 結(jié)果DRB組的24hUPQM、Bun、Scr顯著高于相同時(shí)間點(diǎn)的Sham組和UPHT組；GSI隨病變的進(jìn)展逐步升高。免疫組化和原位雜

7、交顯示，DRB組的腎小球表達(dá)Ang1mRNA和Ang1蛋白下調(diào)，表達(dá)Ang2mRNA和Ang2蛋白上調(diào)。電鏡顯示，DRB組逐漸出現(xiàn)嚴(yán)重的足細(xì)胞損害。Sham組和UPHT組的腎小球沒(méi)有病理改變。DRB組的Ang1mRNA表達(dá)與Ang2mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；Ang1蛋白表達(dá)與Ang1mRNA表達(dá)呈正相關(guān)，與Ang2蛋白表達(dá)、CoIV蛋白表達(dá)、GSI、24hUPQM、Bun、Scr呈負(fù)相關(guān)；Ang2蛋白表達(dá)與Ang2mRNA表達(dá)、CoIV蛋白

8、表達(dá)、GSI、24hUPQM、Bun、Scr之間呈正相關(guān)。 結(jié)論足細(xì)胞損傷可能是導(dǎo)致腎小球內(nèi)Ang1和Ang2表達(dá)失衡的主要原因，Ang1表達(dá)下調(diào)，失去對(duì)Ang2的抑制，使Ang2表達(dá)上調(diào)，并介導(dǎo)腎小球?yàn)V過(guò)膜通透性增高和腎小球硬化的形成。 二、血管生成素的異常表達(dá)與腎小球毛細(xì)血管損失的關(guān)系及其意義 目的探討足細(xì)胞損傷后，腎小球內(nèi)Ang1和Ang2的表達(dá)改變與腎小球毛細(xì)血管損失的關(guān)系及其意義。 方法100只

9、健康雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組30只、單側(cè)腎切除(Uninephrectomy，UPHT)組30只和單側(cè)腎切除+柔紅霉素(Daunorubicin，DRB)組40只。DRB組大鼠，摘除左腎后的第7、14天，從尾靜脈注射柔紅霉素5mg·kg-1各1次。Sham組和UPHT組亦同時(shí)以等量生理鹽水尾靜脈注射2次。完成上述處理后的第1周、2周、4周、6周、8周，隨機(jī)取各組大鼠6只，采血和24h尿液檢測(cè)肌酐清除率(Ccr)

10、，用PAS染色、免疫組化和原位雜交進(jìn)行腎組織學(xué)分析，并用TUNEL法和透射電鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果DRB組的Ccr顯著低于相同時(shí)間點(diǎn)的Sham組和UPHT組；腎小球硬化指數(shù)(GSI)隨病變的進(jìn)展逐步升高。透射電鏡下可見(jiàn)到凋亡的內(nèi)皮細(xì)胞，腎小球凋亡指數(shù)(GAI)呈逐步增高的趨勢(shì)，而腎小球毛細(xì)血管密度(GCD)呈逐步下降的趨勢(shì)，DRB組的Ang1mRNA和蛋白表達(dá)量呈顯著下降的趨勢(shì)，Ang2mRNA和蛋白表達(dá)量呈逐漸增高的趨勢(shì)。Fa

11、s、FasL和Caspase-3蛋白在腎小球內(nèi)的表達(dá)也呈逐漸增高的趨勢(shì)。相關(guān)分析顯示，Ang1mRN和蛋白分別與Fas、FasL和Caspase-3蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與GCD、Ccr呈正相關(guān)，與GAI、GSI呈負(fù)相關(guān)。Ang2mRN和蛋白分別與Fas、FasL和Caspase-3蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，與GCD、Ccr呈負(fù)相關(guān)，與GAI、GSI呈正相關(guān)。 結(jié)論腎小球足細(xì)胞損傷后，局部Ang1和Ang2的表達(dá)平衡發(fā)生改變，與Fas/Fa