姜黃素誘導HO-1表達抗大鼠動脈粥樣硬化作用的研究.pdf

1、目的：探討長期應用姜黃素（Curcumin，CMN）能否誘導大鼠主動脈平滑肌細胞（Vascular Smooth Muscle Cell，VSMC）安全、持久地表達血紅素氧合酶-l（Heme Oxygenase-1，HO-1），以及誘導HO-1表達能否有效發(fā)揮內(nèi)源性抗動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）作用。 方法：以3月齡雄性Wistar大鼠46只為研究對象，隨機分為CMN組（A組）、鋅原卟啉（Zinc pro

2、toporphyrinⅨ，ZnPPⅨ）組（B組）、CMN+ ZnPPⅨ組（C組）、高脂飼料組（D組）及普通對照組（E組）共5組，D組大鼠14只，余每組各8只，實驗時間為14周。步驟分為：1．建立AS模型。除E組給予普通飼料喂養(yǎng)外，其余四組均同法復制AS模型，具體方法是：給予大鼠高脂飼料喂養(yǎng)并于最初時一次性給予腹腔注射維生素D注射液70萬U/kg。于6周末、10周末及14周末分別隨機選取D組大鼠2只處死，取降主動脈起始段1-2厘米送病檢，

3、追蹤了解AS形成狀況。2．藥物干預對HO-1蛋白表達及HO-1活力的影響。于建立AS模型初始即予A組CMN3mg/kg隔日腹腔注射一次；B組ZnPPⅨ7．5mg/kg、隔日腹腔注射一次；C組按A、B組方法同時給予CMN及ZnPPⅨ，14周末實驗結(jié)束。處死大鼠，取降主動脈一部份行免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）檢查，了解細胞內(nèi)HO-1表達及分布情況，在200倍光鏡下見細胞胞漿內(nèi)有棕褐色顆粒樣產(chǎn)物的即為HO-

4、1蛋白表達陽性細胞，對每張切片隨機測定5個不重復視野的光密度（Optical Density，OD）值，取平均值代表HO-1蛋白表達量；另一部份主動脈組織用作勻漿測定HO-1活力，即根據(jù)HO-1降解血紅素生成膽紅素的原理，通過測定反應體系中膽紅素的生成量代表HO-1活力。比較不同組間HO-1蛋白表達量及HO-1活力差異。3．誘導及抑制HO-1表達對AS的影響及相關(guān)機制研究。實驗結(jié)束時，分別取各組大鼠降主動脈起始段部分，剝除外膜結(jié)締組織置

5、入10%中性緩沖甲醛液中固定，常規(guī)石蠟切片及蘇木素伊紅（Hematoxylinand Eosin，HE）染色，光鏡下觀察平滑肌細胞、泡沫細胞及內(nèi)膜、中膜變化。于多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)測量內(nèi)膜、中膜厚度及其比值。比較不同干預措施對AS的影響。4．同時在實驗結(jié)束處死大鼠時，經(jīng)心臟取血行各組肝腎功、血脂、C-反應蛋白（C-Reactive Protein，CRP）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、丙二醛（Malon

6、dialdehyde，MDA）、氧化低密度脂蛋白（oxidized Low Density Lipoprotein，ox-LDL）等指標檢測，比較不同處理方法下各項指標的變化情況。另外對A、E組大鼠腎臟行病理切片檢查，結(jié)合腎功評價CMN的安全性。 結(jié)果：1．大鼠AS模型成功建立，與E組比較，14周末時病理切片見D組主動脈內(nèi)膜明顯增厚，向管腔突出，內(nèi)膜下可見大量泡沫細胞聚集；中膜平滑肌細胞排列紊亂、極性消失，內(nèi)膜與中膜厚度比例明顯

7、增加（P<0．05）。2．與B、C、D組相比，A組HO-1蛋白表達量明顯增加，HO-1活力顯著升高，AS程度則顯著減輕，B組HO-1蛋白表達明顯降低，HO-1活力尤其低下，其AS程度則在各組中最明顯。C組HO-1蛋白表達及活力與B組相似（P>0．05），其AS程度較B組稍輕而與D組相似（P>0．05）。3．各組間血脂、肝功、CRP、IL-6、MDA及ox-LDL均差別顯著，其中應用ZnPPⅨ的B、C兩組各指標顯著高于D組（均為P<0．0

8、5）：而應用CMN的A組以上指標則明顯低于D組（均為P<0．05）。4．A組大鼠腎功較E組未見明顯差別（P>0．05），其腎臟病理切片亦未見明顯異常。 結(jié)論：1．高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射維生素D可復制大鼠AS模型。2．CMN能顯著誘導大鼠VSMC表達HO-1蛋白并增加HO-1活力：但這種誘導作用可被ZnPPⅨ阻斷。3．誘導HO-1表達可能是CMN抗AS的主要機制。4．CMN抗AS作用除誘導HO-1外可能還存在其他機制。5．長期應