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文檔簡介
1、目的:很多疾病都可以造成腎動脈狹窄動脈狹窄,其中最常見的原因是肌纖維發(fā)育不良(FMD)和動脈粥樣硬化性腎動脈狹窄(ARAS)。與FMD相比,ARAS更能引起腎臟損傷。在我國,ARAS已成為引起腎動脈狹窄的最主要的病因。近幾年研究發(fā)現(xiàn),一些抗高血壓藥物在降低血壓的同時(shí),也具有腎保護(hù)作用,但其具體的保護(hù)機(jī)制是什么,現(xiàn)在還不是很清楚。ARAS可通過多種途徑導(dǎo)致腎功能損傷,其中氧化應(yīng)激成為幾年研究的主要途徑,而血紅素加氧酶-1(HO-1)具有抗
2、氧化功能,且已有研究表明其具有一定的腎臟保護(hù)作用。在很多腎臟損傷模型中,HO-1可被一定的誘導(dǎo)因素誘導(dǎo)表達(dá),起到腎保護(hù)作用,但不同降壓藥包括直接腎素抑制劑,鈣拮抗劑能否誘導(dǎo)HO-1在動脈粥樣硬化合并腎動脈狹窄模型腎臟中表達(dá),在國內(nèi)外還罕有相關(guān)的報(bào)道。為此,本實(shí)驗(yàn)通過采用夾畢單側(cè)腎動脈,并聯(lián)合高脂飼養(yǎng)及注射VitD3建立動脈粥樣硬化合并腎動脈狹窄動物模型,通過測定夾畢側(cè)腎臟中HO-1和NADPH氧化酶的表達(dá)情況來探索不同降壓藥(直接腎素抑
3、制劑,鈣拮抗劑)對腎臟的保護(hù)作用及可能的機(jī)制,為臨床能更有效的治療腎動脈狹窄所致的腎損傷提供理論依據(jù)和策略。
方法:(1)動物模型的建立:將36只雄性的SD大鼠隨機(jī)分為二腎一夾(Two Kidney One Clip,2K1C)組和對照組,2K1C組采用平行針灸針縮窄法造成腎動脈狹窄,對照組只暴露腎動脈,不做狹窄。各組大鼠均予以注射VitD350萬IU/kg并高脂飼養(yǎng)十周建立AS合并腎動脈狹窄動物模型。(2)直接腎素抑制劑和鈣
4、拮抗劑對腎動脈狹窄性大鼠腎臟的保護(hù)作用的研究:飼養(yǎng)十周后,將對照組和滿足實(shí)驗(yàn)條件的2K1C組大鼠分別隨機(jī)分組并給與干預(yù)措施:生理鹽水組,阿利吉侖組及苯磺酸氨氯地平組,干預(yù)四周后處理大鼠,分別進(jìn)行一下實(shí)驗(yàn):1)游離并切取SD大鼠狹窄側(cè)腎臟,一部分石蠟包埋做PAS染色及免疫組化,一部分-70℃冷凍保存。2)免疫組化法檢測HO-1和p47-phox(NADPH氧化酶的一種亞型)的表達(dá):取腎臟石蠟切片,采用SP法分別檢測 HO-1和p47-ph
5、ox在腎臟中的表達(dá)變化。圖像采集后用Image-pro-plus6.0軟件分析。(3)RT-PCR法檢測HO-1和p47-phox的表達(dá):取冷凍保存的腎臟組織經(jīng)提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄,擴(kuò)增,電泳后,用Quangtity one軟件分析.
結(jié)果:(1)免疫組化結(jié)果:比較相同手術(shù)造模方式的實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟組織中的HO-1, p47-phox的表達(dá)的光密度值(IOD)。1)腎臟組織中HO-1的表達(dá):2K1C阿利吉侖組和氨氯地平組與生理鹽水
6、組間及阿利吉侖組與氨氯地平組間的差異均有顯著性(P<0.05)2)腎臟組織中ph-47的表達(dá):結(jié)果同上。(2)RT-PCR檢測相同造模方式各實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織中HO-1,與 p47-phox的表達(dá):以目標(biāo)條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值表示,與生理鹽水組比較,HO-1在阿利吉侖組與氨氯地平組中的表達(dá)均顯著增加,且阿利吉侖組較氨氯地平組的表達(dá)更顯著。p47-phox在阿利吉侖組與氨氯地平組中的表達(dá)則顯著降低,與免疫組化結(jié)果一致。
結(jié)論:直
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