人MT基因家族結(jié)構(gòu)和功能研究暨TCP10L基因功能初探.pdf

1、肝細(xì)胞癌(HCC)是我國人群中高發(fā)的惡性腫瘤之一，金屬硫蛋白(MTs)是一類富含半胱氨酸且能結(jié)合金屬離子的低分子量蛋白質(zhì)，參與體內(nèi)重金屬的解毒和抗氧化過程。在本項研究中，我們鑒定了MT家族中的成員數(shù)目，分析了MT家族各個基因的多組織表達(dá)情況，并分析了與組織表達(dá)特征相關(guān)的可能機(jī)制，分析了MT家族各個基因在肝癌中表達(dá)情況，檢測了肝癌中Cu、Zn和Fe等金屬離子的豐度。研究結(jié)果進(jìn)一步加深了對人體MT基因結(jié)構(gòu)與功能的認(rèn)識，也為闡明HCC發(fā)生的分

2、子機(jī)制提供了有重要價值的資料。肝臟是人體多能性器官，具有解毒，物質(zhì)合成，調(diào)節(jié)營養(yǎng)代謝平衡的功能。TCP10L基因是一種新的957bp的cDNA，本文利用人16種組織的雜交膜對TCP10L基因的表達(dá)譜進(jìn)行了檢測，Northern雜交結(jié)果顯示該基因只在睪丸和肝臟中表達(dá)。我們將TCP10L基因的ORF克隆到原核表達(dá)載體pET32a，并在原核系統(tǒng)E.coli.(BL21DE3)中進(jìn)行了重組表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在肝臟組織切片中，雜交信號出現(xiàn)在肝癌和癌

3、旁組織的細(xì)胞中，而在結(jié)締組織細(xì)胞中信號很弱；在睪丸組織切片中，雜交信號在生精小管中出現(xiàn)，并且特異地出現(xiàn)在生精細(xì)胞階段。用TCP10L進(jìn)行酵母雙雜研究時，得到了與TCP10L基因可能相互作用的幾個基因，其中一個為凋亡相關(guān)蛋白激酶-3基因(DAPK3)。經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)，DAPK家族的蛋白激酶可以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性和介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對它們功能的研究具有極其重要的意義。酵母雙雜交的結(jié)果提示兩者可能存在互作，WesternBlotting結(jié)果證實TCP10