食淀粉乳桿菌分泌蛋白粗提以及抗病毒作用的初步分析.pdf

1、本試驗(yàn)旨在研究食淀粉乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)物以及發(fā)酵產(chǎn)物中不同分子量范圍分泌蛋白的抗RV的抗病毒效應(yīng)，分析膽鹽、胰酶處理前后各分子量段的分泌蛋白抗病毒能力，比較它們之間的差異。本研究首先采用硫酸銨沉淀法提取食淀粉乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)物中總蛋白，然后分別用孔徑為3KD、10KD、50KD的超濾離心管過(guò)濾并獲取發(fā)酵產(chǎn)物中的1-3 KD、3KD-10 KD、10-50 KD、50 KD以上四段分子量范圍內(nèi)蛋白。
　　實(shí)驗(yàn)以IPEC-J2細(xì)胞為平臺(tái)，首先采

2、用MTT法和Karber法檢測(cè)食淀粉乳桿菌的MRS正常培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物、去蛋白MRS培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物、總蛋白以及各分子量段蛋白的抗病毒能力。
　　檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食淀粉乳桿菌的MRS正常培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)物的抗病毒作用最強(qiáng)，去蛋白質(zhì)MRS培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)物、總蛋白以及各分子量段蛋白均具有抗病毒作用，且病毒抑制率:MRS正常培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物＞去蛋白質(zhì)MRS培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物＞總蛋白＞1-3 KD分子量段蛋白＞3-10KD分子量段蛋白＞10-50 KD分子量段

3、蛋白＞大于50KD分子量段蛋白。
　　其次，選擇分泌蛋白各分子量段，分別使用胰酶、豬膽鹽單獨(dú)處理和混合處理，接種于IPEC-J2細(xì)胞，初步模擬腸道內(nèi)環(huán)境;再次采用MTT法和Karber法檢測(cè)抗病毒活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)胰酶、豬膽鹽以及胰酶膽鹽混合物處理過(guò)的蛋白與處理前相比，其抗病毒活性變化差異不顯著(P＞0.05)，說(shuō)明各分子量段的分泌蛋白均具有耐胰酶、耐膽鹽的特性。
　　將總蛋白液相色譜-質(zhì)譜分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)1-3 KD

4、分子量段范圍內(nèi)的蛋白（僅在Tricine-SDS-PAGE電泳檢出），3-10 KD分子量段范圍內(nèi)的蛋白檢測(cè)到一種，10-50 KD分子量段范圍內(nèi)的蛋白有24種，大于50KD分子量段的蛋白有21種。其中大多蛋白功能已經(jīng)明確，少數(shù)功能還有待研究。
　　為進(jìn)一步探討抗RV病毒的機(jī)制，根據(jù)蔗糖對(duì)豬的小腸上皮細(xì)胞的免疫增強(qiáng)作用，實(shí)驗(yàn)采用蔗糖聯(lián)合總蛋白檢測(cè)其混合物的抗病毒作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，單獨(dú)蔗糖組與病毒組抗病毒能力差異不顯著(P＞0.0

5、5)，蔗糖聯(lián)合總蛋白組與總蛋白組抗病毒能力差異也不顯著(P＞0.05)。
　　由于乙酸在腸道內(nèi)含量較高，所以本實(shí)驗(yàn)采用MTT法，進(jìn)行單獨(dú)乙酸、乙酸與總蛋白聯(lián)合使用的抗病毒作用，結(jié)果顯示單獨(dú)乙酸抗病毒能力與病毒組比較差異不顯著(P＞0.05)，乙酸聯(lián)合總蛋白抗病毒能力強(qiáng)于單獨(dú)使用蛋白組，且差異顯著(P＜0.05)，說(shuō)明乙酸加強(qiáng)了總蛋白的抗病毒作用，提示短鏈脂肪酸中的乙酸可以加強(qiáng)食淀粉乳桿菌的抗病毒作用。
　　綜上所述，食淀粉乳