CPP及ER滯留信號在腫瘤治療性肽疫苗中的修飾研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文CPP及ER滯留信號在腫瘤治療性肽疫苗中的修飾研究姓名：王莉申請學位級別：博士專業(yè)：免疫學指導教師：吳玉章20040501第三軍醫(yī)大學博士學位論文 8 網的轉運過程是兩個至關重要的環(huán)節(jié) 理論上 若促進外源性抗原肽轉運至 APC 胞漿或 ER 腔 則應增強抗原肽被 MHC- 類分子呈遞的效率 因此 理想的外源性抗原肽傳輸方式應該將外源性抗原肽靶向轉運至胞漿或 ER設想一 將 T a tC P P 引入多肽疫苗的分子

2、設計 將多肽疫苗有效導入活細胞的胞漿 近年來 在細胞生物 基因治療及藥物體內轉運等研究領域中興起了對細胞膜通透性肽(cell- penetrating peptides CPP)的研究熱 CPP 屬于小分子肽類 長度為幾個到幾十個氨基酸不等 研究證實 CPP 可有效攜帶蛋白 多肽 DNA 甚至顆粒性物質等通過受體依賴或非依賴方式 穿過大多數活細胞的質膜進入胞漿 并在一定濃度范圍內對細胞無任何毒副作用 目前已有多種蛋白來源的 CPPs

3、得到證實 這些蛋白包括果蠅的antennapedia 蛋白 單純皰疹病毒的VP22 蛋白及 I 型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)的 Tat 蛋白 Tat 蛋白是 HIV-1 的轉錄活化因子 含 86- 102 個氨基酸殘基 該蛋白可自由穿過活細胞質膜 并且整個蛋白或片段(第 37-72 位氨基酸)可定位于胞漿及胞核研究表明 Tat 蛋白的堿性區(qū)(第 49-58 位氨基酸)對其實現細胞內在化起關鍵作用 利用來源于該蛋白堿性區(qū)的肽片段可將其

4、它蛋白有效導入活細胞內功 迄今為止 研究報道有數種長短不一的源于 Tat 的短肽顯示出較強的穿膜功能 其中最短的片段是Tat49-57 我們設想 若將 Tat49-57 與 CTL 表位直接連接 可望借助 Tat49-57 的穿膜活性將抗原肽直接帶入細胞漿 最終使其有效進入 MHC- 類抗原呈遞途徑設想二 將 E R 滯留信號肽引入多肽疫苗的分子設計 促使多肽疫苗直接靶向 E R研究表明 將 ER 轉位信號肽直接連到蛋白抗原的 N 末端

5、 可使抗原以一種 TAP非依賴的方式有效地被 APC 中的 MHC- 類分子呈遞 但這種 ER 轉位信號發(fā)揮其轉位功能的前提是它所引導的抗原分子必須位于胞漿內 這使得 N 末端 ER 轉位信號肽在多肽類疫苗研究中的應用受到限制 另一種 ER 靶向性轉運的信號是位于蛋白 C 末端 以賴氨酸- 天冬氨酸- 谷氨酸- 亮氨酸(Lys- Asp-Glu-Leu KDEL) 為代表的 ER 滯留信號肽 ER 定居蛋白的 C 末端大部分都具有 KD

6、EL 或類似的基序 特異性識別并結合 KDEL 基序的受體主要集中于 ER 腔 高爾基體及中間區(qū) 研究表明 多種細菌或植物毒素的 C 末端具有 KDEL 或類似該序列的信號肽 它們可通過 KDEL 受體介導的逆行轉運方式 經胞吞作用后從細胞外靶向至 ER 再由 ER 轉移至胞漿 最終發(fā)揮其細胞毒性作用 在另一些本身不含 KDEL 基序的毒素分子 C 末端添加 KDEL 基序后可明顯增強這些毒素在細胞內的穩(wěn)定性及毒性作用實驗證實 在 pH