氧化型甘露聚糖修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗抗腫瘤免疫試驗研究.pdf

1、目的:腫瘤疫苗是目前腫瘤防治研究的重點之一.積極主動的免疫治療,激發(fā)機體自身的抗瘤免疫反應(yīng)策略中,如何加強DC、巨噬細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞(antigen presentation cell,APC)的抗原攝取及有效的抗原呈遞,進而活化免疫效應(yīng)細(xì)胞是疫苗治療成功的關(guān)鍵之一.DC、巨噬細(xì)胞的表面高表達甘露糖受體(mannose receptor,MR),研究表明MR在DC、巨噬細(xì)胞的抗原識別、攝取,及誘導(dǎo)機體的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用.甘露聚

2、糖修飾的腫瘤抗原免疫顯著加強了APC的抗原攝取及特異T淋巴細(xì)胞活化,特別是有研究發(fā)現(xiàn)氧化型甘露聚糖修飾的腫瘤抗原有效誘導(dǎo)了小鼠的CTL抗瘤免疫反應(yīng).本研究以整個腫瘤細(xì)胞作為抗原來源,經(jīng)氧化型甘露聚糖修飾作為疫苗,觀察其誘導(dǎo)的保護性抗瘤免疫反應(yīng),并對其激發(fā)的免疫效應(yīng)機制進行探討.方法:甘露聚糖經(jīng)高碘酸鈉(NaIO<,4>)氧化,通過形成的醛基與細(xì)胞膜蛋白胞外段賴氨酸殘基上的ε氨基反應(yīng)形成Schiff鍵,體外直接修飾小鼠肺癌LL/2c(ox

3、idized mannan-modified LL/2c,ox-M-LL2),結(jié)腸癌CT26腫瘤細(xì)胞株(oxidized mannan-modified CT26,ox-M-C26),固定滅活作為氧化型甘露聚糖修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗.試驗組細(xì)胞疫苗與未修飾的僅固定滅活的LL/2c(fixed LL/2c,f-LL2)、CT26(fixed CT26,f-C26)細(xì)胞疫苗及PBS免疫小鼠,觀察對母本腫瘤模型保護性抗瘤效應(yīng).體內(nèi)亞類T細(xì)胞的單克

4、隆抗體敲除試驗分析亞類T細(xì)胞在抗瘤免疫中的作用.<'51>Cr釋放實驗觀察脾臟T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的CTL(cytotoxic T lymphocytes,CTL)殺傷活性.Western Blot分析小鼠免疫血清對腫瘤抗原的特異識別,直接免疫熒光法檢測腫瘤組織(冰凍切片)內(nèi)抗體的沉積.結(jié)論:以LL/2c,CT26整個腫瘤細(xì)胞作為抗原來源,經(jīng)氧化型甘露聚糖的修飾有效誘導(dǎo)了保護性抗瘤免疫反應(yīng),CT26模型分析顯示抗瘤機制依賴于腫瘤細(xì)胞特異性的