地塞米松對人眼小梁細胞RhoGDI和RhoA蛋白表達的影響.pdf

1、目的： 目前原發(fā)性開角型青光眼的確切病因仍然不明。小梁網(wǎng)作為房水流出的通路，是房水排出的主要阻力部位，也是開角型青光眼的主要病理部位。小梁細胞結(jié)構(gòu)和功能的變化可能影響房水引流的效率，細胞內(nèi)相關(guān)蛋白的表達變化，可能是開角型青光眼發(fā)病機理的分子基礎(chǔ)，也是當(dāng)前科學(xué)研究的熱點問題之一。本研究選用體外培養(yǎng)永生化的人眼小梁細胞株，將不同濃度的地塞米松作為激素性處理因素，觀察不同處理時間細胞形態(tài)和生長狀態(tài)的變化，同時應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測細胞

2、內(nèi)Rho GTP酶活性調(diào)節(jié)蛋白RhoGDI及其效應(yīng)物之一RhoA蛋白的表達和變化，旨在認識地塞米松處理下人眼小梁細胞生長增殖和功能活性的變化，并進一步探討細胞內(nèi)分子水平的改變，為開角型青光眼的發(fā)病機理提供新思路，也為其預(yù)防和治療措施提供新方向。 方法： 用含15﹪小牛血清的DMEM／F12培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)永生化人眼小梁細胞株，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和地塞米松處理后的變化。采用MTT比色法檢測10<'-6>M和10<'

3、-7>M地塞米松處理1-5天的小梁細胞與對照組相比生長增殖的變化，并分別繪制兩種濃度處理組和對照組細胞的生長曲線。免疫細胞化學(xué)方法檢測小梁細胞內(nèi)RhoGDI蛋白的表達和地塞米松處理后的變化。免疫印記法檢測小梁細胞內(nèi)RhoGDI和RhoA分子的表達和地塞米松處理后的表達差異，并進一步摸索10<'-5>M、5*10<'-6>M、10<'-6>M、5*10<'-7>M和10<'-7>M地塞米松處理24小時的小梁細胞內(nèi)RhoGDl分子表達的變化

4、趨勢。 結(jié)果： 成功體外培養(yǎng)永生化人眼小梁細胞株，顯微鏡下地塞米松處理的小梁細胞形態(tài)與對照組相比并無明顯變化。MTT比色法繪制小梁細胞生長曲線結(jié)果顯示，10<'-6>M和10<'-7>M地塞米松處理2-3天抑制細胞生長增殖，前者抑制作用更明顯。免疫印記法結(jié)果顯示小梁細胞內(nèi)有RhoGDI和RhoA蛋白分子表達，地塞米松處理組的細胞與對照組相比RhoGDl分子表達減少，RhoA分子表達增加。各種濃度地塞米松均抑制細胞內(nèi)Rho

5、GDl分子表達，濃度越高抑制作用越強。免疫細胞化學(xué)法結(jié)果顯示小梁細胞RhoGDl分子表達陽性，地塞米松處理的細朐表達減小。 結(jié)論： 地塞米松抑制人眼小梁細胞的生長增殖活力。小梁細胞內(nèi)有RhoGDI蛋白和RhoA蛋白分子表達，地塞米松能夠下調(diào)RhoGDI蛋白的表達，同時上調(diào)RhoA蛋白的表達，前一種作用隨濃度增高呈現(xiàn)增強趨勢。小梁細胞內(nèi)Rho GTP酶及其調(diào)節(jié)蛋白的變化可能參與開角型青光眼的發(fā)病過程，但其問的確切機制，尚有