DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞遷移侵襲的影響.pdf

1、目的：我們前期實(shí)驗(yàn)表明，二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）通過(guò)阻斷Rac1-Pak1/Rock通路下調(diào)LIMK1抑制人胃癌MGC803細(xì)胞的遷移與侵襲。近來(lái)蛋白組學(xué)發(fā)現(xiàn)，DADS可下調(diào)RhoGDI2蛋白。本研究在前期研究基礎(chǔ)上，通過(guò)構(gòu)建RhoGDI2穩(wěn)定高表達(dá) MGC803細(xì)胞系，探討DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：將 pIRES2-EGFP-RhoGDI2真核

2、表達(dá)載體轉(zhuǎn)染 MGC803細(xì)胞，構(gòu)建RhoGDI2穩(wěn)定高表達(dá) MGC803細(xì)胞系。Western blot驗(yàn)證RhoGDI2蛋白的表達(dá)水平。劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞遷移侵襲的影響。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立RhoGDI2穩(wěn)定高表達(dá)的MGC803細(xì)胞系。
　　兩組轉(zhuǎn)染細(xì)胞（Rh

3、oGDI2/MGC803與pIRES2-EGFP/MGC803）均可見(jiàn)綠色熒光。Western blot顯示，RhoGDI2/MGC803細(xì)胞中RhoGDI2的蛋白表達(dá)量均明顯高于pIRES2-EGFP/MGC803及MGC803細(xì)胞，證明成功構(gòu)建RhoGDI2穩(wěn)定高表達(dá)的MGC803細(xì)胞系。
　　2. DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞遷移的影響。
　　劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，RhoGDI2/MGC803組的劃痕距離小于

4、pIRES2-EGFP/MGC803組和MGC803組(P<0.05)，表明 RhoGDI2高表達(dá)促進(jìn)MGC803細(xì)胞的遷移。DADS處理24h的MGC803組、空載體組、RhoGDI2高表達(dá)組的劃痕距離明顯分別大于相對(duì)應(yīng)的DADS未處理組(P<0.05)，表明DADS抑制MGC803、 RhoGDI2/MGC803的遷移。
　　3. DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞侵襲的影響。
　　侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，RhoGDI

5、2高表達(dá)組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著多于MGC803組和空載體組(P<0.05)，表明RhoGDI2高表達(dá)促進(jìn)MGC803細(xì)胞的侵襲。DADS處理24h后的MGC803組、空載體組、RhoGDI2高表達(dá)組的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯小于DADS未處理的相對(duì)應(yīng)各組(P<0.05)，表明 DADS抑制 MGC803、RhoGDI2/MGC803的侵襲。
　　4. DADS對(duì)RhoGDI2高表達(dá)MGC803細(xì)胞成瘤能力的影響。
　　裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)顯示，MG

6、C803組移植瘤生長(zhǎng)速度慢于RhoGDI2高表達(dá)組(P<0.05)，RhoGDI2高表達(dá)可促進(jìn)MGC803細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)能力。DADS處理組的移植瘤生長(zhǎng)速度顯著慢于未處理組(P<0.05)，表明DADS可抑制MGC803組與RhoGDI2高表達(dá)組移植瘤生長(zhǎng)。移植瘤免疫組化顯示，DADS處理組較相應(yīng)的未處理組，E-cadherin表達(dá)量增多，Vimentin、Ki-67、CD34的表達(dá)量減少；RhoGDI2高表達(dá)組較 MGC803組的V