牛腸道病毒2A和3C蛋白酶通過負(fù)調(diào)控MAVS抑制牛β干擾素表達(dá)的研究.pdf

1、牛腸道病毒(bovine enterovirus，BEV)屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，為單股正鏈RNA病毒。BEV可通過糞口傳播，常和多種病原體一起引發(fā)動(dòng)物混合感染，因其可感染消化道且物理性質(zhì)穩(wěn)定，故可通過宿主排便而暴露于水源環(huán)境中，從而對牧場造成潛在危害。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究發(fā)現(xiàn)，BEV病毒可以感染幼兔和白化豚鼠，并引起感染動(dòng)物肺臟、肝臟明顯的充血腫脹，病毒粒子可以在肺、腸、脾、肝和腎等內(nèi)臟組織中增殖。BEV感染會(huì)引起機(jī)體帶毒，可能會(huì)

2、降低宿主的免疫反應(yīng)而為其他細(xì)菌和病毒復(fù)制提供可乘之機(jī)，為繼續(xù)探索BEV是如何逃逸宿主天然免疫本研究進(jìn)行了以下探索。
　　檢測BEV感染對牛Ⅰ型干擾素(Interferons，IFNs)、干擾素效應(yīng)分子(IFN-stimulated genes，ISGs)和RLR信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BEV感染不能明顯引起B(yǎng)oIFN-β、ISGs和RLR信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)增多;說明BEV感染細(xì)胞中Ⅰ型干擾素應(yīng)答反應(yīng)較弱。為進(jìn)一步探究

3、BEV是如何拮抗牛Ⅰ型IFN干擾素的生成，本研究克隆表達(dá)了BEV的非結(jié)構(gòu)蛋白2A、3C，通過在MDBK、BL細(xì)胞中過表達(dá)2A、3C檢測其對BoIFN-β、ISGs和RLR信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)的影響;實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示2A、3C可抑制BoIFN-β、Mx1、ISG15和RIG-I、MAVS的轉(zhuǎn)錄表達(dá);Western Blot結(jié)果顯示2A、3C負(fù)調(diào)控MAVS的蛋白表達(dá)，且抑制過表達(dá)MAVS引起的Mx1和NF-κB p65蛋白的表達(dá);

4、2A、3C在敲減MAVS表達(dá)的MDBK細(xì)胞中不抑制BoIFN-β、ISGs的轉(zhuǎn)錄表達(dá);說明2A、3C通過MAVS拮抗干擾素的生成。雙熒光素酶系統(tǒng)檢測結(jié)果顯示2A、3C抑制IFN-β啟動(dòng)子、ISRE和NF-κB所調(diào)控的熒光素酶活性。此外qPCR和TCID50檢測結(jié)果顯示BEV感染基因敲減BoMAVS的MDBKpsiMAVS和MDBKshMAVS細(xì)胞中的病毒滴度，高于BEV感染正常MDBK細(xì)胞的病毒滴度。
　　本研究發(fā)現(xiàn)BEV感染細(xì)胞