自噬通過抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生負向調(diào)控抗病毒固有免疫反應.pdf

1、固有免疫(innate immunity)是機體抵抗病毒的第一道防線。當病毒入侵機體后，即被模式識別受體(pattern-recognition receptors，PRRs)識別，快速誘導固有免疫應答，產(chǎn)生大量的Ⅰ型干擾素(interferon，IFN)和促炎因子。Ⅰ型干擾素可以與胞膜上相應的受體結(jié)合，誘導一系列抗病毒蛋白高表達，進而抑制病毒的復制和感染，發(fā)揮強有力的抗病毒效應。因此，Ⅰ型干擾素的表達調(diào)控一直是抗病毒免疫研究領(lǐng)域的熱點

2、。
　　自噬是一種發(fā)生在真核細胞內(nèi)并且高度保守的自我穩(wěn)態(tài)機制，對細胞抵抗外部刺激有非常重要的意義。病毒感染可以引起自噬的產(chǎn)生，但是目前關(guān)于自噬在病毒感染過程中所起的作用的研究很少，機制尚不明確。所以我們對自噬在抗病毒固有免疫應答中的作用機制進行了探究。我們構(gòu)建了自噬相關(guān)基因7(Autophagyrelated gene7，ATG7)在髓系細胞中特異性敲除的小鼠(Atg7f/f Lysm-Cre)。用VSV-GFP病毒感染小鼠的腹腔

3、巨噬細胞，發(fā)現(xiàn)自噬缺陷之后小鼠的腹腔巨噬細胞對病毒的清除率增強，具有更強的抗感染能力。隨后，我們給小鼠腹腔注射VSV病毒觀察小鼠的存活率，得到了和體外實驗一致的結(jié)果，自噬缺陷組小鼠的存活率明顯升高，肺部組織炎性浸潤增強，巨噬細胞、中性粒細胞富集明顯增多，病毒復制減少，小鼠抗病毒能力明顯增強。因為Ⅰ型干擾素在抗病毒固有免疫中發(fā)揮著重要作用，所以我們接著探究了自噬缺陷引起的這種抗病毒效應是否是因為影響了Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。所以我們用病毒感染小

4、鼠的腹腔巨噬細胞，檢測了對照組和自噬敲除組小鼠腹腔巨噬細胞Ⅰ型干擾素mRNA的表達情況，發(fā)現(xiàn)病毒感染之后自噬缺陷組的Ⅰ型干擾素mRNA表達明顯增強。證實了自噬缺陷確實影響了Ⅰ型干擾素的合成，從而增強了抗病毒效應。VSV病毒是一種dsRNA病毒，主要通過活化TLR3信號通路和RIG-Ⅰ信號通路來引起Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生，隨后我們對RNA病毒活化的信號通路進行了篩選和驗證。我們用免疫印跡實驗對不同信號通路主要的抗病毒蛋白的降解情況進行了檢測，發(fā)