糖尿病心肌病的組織病理學(xué)及與心肌纖維化相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β-,1-和凋亡相關(guān)蛋白Fas在糖尿病心肌病中發(fā)生的作用.pdf

1、背景資料：隨著社會(huì)發(fā)展特別飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國糖尿病(DM，diabetesmallitus)發(fā)病率逐年上升。近年來學(xué)者對我國大宗DM患病率流行病學(xué)調(diào)查顯示：發(fā)病率隨年齡逐年上升，六十歲以上老年人DM患病率超過11％。心血管疾病(CVD，Cardiovascular Disease)是DM最常見也是最重要的并發(fā)癥，據(jù)美國糖尿病協(xié)會(huì)的統(tǒng)計(jì)：在美國DM患者死亡病例中，接近80％是由于心血管并發(fā)癥所引起。過去幾十年的時(shí)間里，學(xué)者一直關(guān)注于心肌

2、以及心肌間血管以及冠狀動(dòng)脈的形態(tài)學(xué)改變，隨著研究工作的進(jìn)展，人們越來越多的開始關(guān)注心肌機(jī)能紊亂的發(fā)病機(jī)理，并且認(rèn)識到糖尿病心肌病(DCM，diabetic cardiomyopathy)在其中所具有的重要性。
　　 目的：觀察DM患者心肌病理組織學(xué)特點(diǎn)；探討DCM的病理組織診斷和可能的發(fā)生機(jī)制，及其同心臟功能異常的相關(guān)性。
　　 材料及方法：本研究在北京醫(yī)院1990—2008年700例成人尸檢資料中，選取其中40例臨床病

3、史清晰、實(shí)驗(yàn)室檢查資料完整，病程3年以上的II型DM患者作為研究對象，另選與DM組年齡、性別相匹配的非DM的病例40例作為對照，所有尸檢皆為死亡12—24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。
　　 (一)大體觀察：對這80例心臟標(biāo)本均進(jìn)行仔細(xì)地大體觀察并對冠狀動(dòng)脈每隔0.2—0.5厘米橫切觀察動(dòng)脈粥樣硬化情況，后于左心室前壁、心尖部、左心外側(cè)壁、二尖瓣下1厘米、室間隔、右心室及左、右心房取材。標(biāo)本經(jīng)4％甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切4微米厚的連續(xù)

4、切片，HE及VG染色。
　　 (二)光鏡觀察。對心肌細(xì)胞壞死，心肌間瘢痕灶及心肌間細(xì)、小動(dòng)脈的病理組織形態(tài)進(jìn)行重點(diǎn)觀察。在高倍鏡視野下對心肌細(xì)胞微小壞死灶及心肌間微小纖維瘢痕灶進(jìn)行計(jì)數(shù)，每例數(shù)20—30個(gè)視野，最后得到每例心肌細(xì)胞微小壞死灶及心肌間微小纖維瘢痕灶的平均數(shù)(個(gè)/HPF)。在200倍顯微鏡視野下，用1厘米長線標(biāo)測微尺測量心肌間細(xì)、小動(dòng)脈壁厚度、管腔外徑直徑及兩者之間的比例。每例取20—30個(gè)條血管，平均取25條血管進(jìn)

5、行測量，最后得到每例心肌間細(xì)、小動(dòng)脈壁厚度、管腔外徑直徑及兩者之間的比例的平均數(shù)。
　　 (三)免疫組化：二組病例均選擇相對不易發(fā)生心肌梗死的左心室側(cè)壁區(qū)域，于二尖瓣下1厘米處心肌標(biāo)本取材，常規(guī)固定，脫水，石蠟包埋，切4μm連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化標(biāo)記C—III(III型膠原，Collagen III)、TGF—β1(轉(zhuǎn)化生長因子—β1，Transforming Growth factor—β1)、Fas(Fas蛋白，F(xiàn)as pr

6、otein)。
　　 (四)特殊染色及免疫組化圖像分析：V.G染色及三種免疫組化切片均進(jìn)行圖像分析，每例取5個(gè)無明確瘢痕及片狀纖維化區(qū)域高倍顯微鏡視野，固定白平衡，感光度及快門速度等拍攝條件，拍攝Jpeg格式圖像，采用專業(yè)醫(yī)學(xué)分析測量圖像軟件image pro—plus V5.2對兩組樣本進(jìn)行積分光密度(integrating opticaldensity，IOD)分析。對比觀察分析兩組樣本膠原纖維總量，III型膠原，TGF—β

7、1以及Fas積分光密度。
　　 (五)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行，p＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：1.形態(tài)學(xué)觀察：40例糖尿病中36例(90.0％)有微小心肌細(xì)胞壞死，37例(92.5％)有微小心肌間纖維癱痕灶形成。40例非糖尿病僅8例(20.0％)有微小心肌細(xì)胞壞死，9(22.5％)例有微小心肌間纖維癱痕灶形成，二組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。糖尿病組心肌

8、間微小血管壁明顯增厚(20.61.μm±4.2)，與對照組(7.2μm±5.2)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2.V.G染色及免疫組化染色結(jié)果：V.G染色及C—III免疫組化染色圖像分析顯示DM組膠原纖維及III型膠原的分布面積及表達(dá)強(qiáng)度遠(yuǎn)高于對照組，DM組和對照組的VG染色I(xiàn)OD值分別為7.944±2.43和3.57±1.64；C—III免疫組化染色I(xiàn)OD值分別為637.66±336.56和135.41±97.

9、44，二組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。TGF—β1免疫組化表達(dá)同膠原纖維分布面積和強(qiáng)度呈正相關(guān)，DM組和對照組TGF—β1 IOD值分別為2101.38±829.33和409.59±260.17，兩組表達(dá)相比具有顯著差異(P＜0.05)。Fas免疫組化檢測DM組的表達(dá)較強(qiáng)，面積廣，IOD值為454.12±220.71，而對照組心肌細(xì)胞Fas表達(dá)弱，表達(dá)面積及強(qiáng)度小于糖尿病組，IOD值為102.61±51.60，兩組表達(dá)相比具有顯

10、著差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1.微小心肌細(xì)胞壞死，微小心肌間瘢痕灶形成，心肌間微小血管壁增厚可能是糖尿病心肌病的病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，對糖尿病心肌病的診斷有重要意義。2.糖尿病患者心肌間質(zhì)纖維化面積及程度比對照組明顯增加，提示糖尿病患者心肌間質(zhì)的纖維化可能是導(dǎo)致其心臟并發(fā)癥重要因素之一。3.TGF— B1在糖尿病患者心肌表達(dá)明顯高于對照組，提示其在心肌間質(zhì)纖維化過程中可能具有一定的意義。4.Fas表達(dá)在DM組顯著高于對照組，