尋常型銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞株糖酵解的初步研究.pdf

1、目的:尋常型銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，具有表皮增殖過度、角化不全、真皮淺層毛細(xì)血管擴(kuò)張及淋巴細(xì)胞浸潤等特征，其表皮與惡性腫瘤存在細(xì)胞過度增殖和局域性缺氧等共同特點(diǎn)。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia-induciblefactor-1α，HIF-1α)在腫瘤中能激活大部分糖酵解相關(guān)酶從而促使細(xì)胞代謝主要朝糖酵解方向進(jìn)行。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)CD147分子在銀屑病患者皮損區(qū)及外周血細(xì)胞中高表達(dá)，并且是銀屑病的易感基因之一，我們還發(fā)現(xiàn)CD

2、147在惡性黑素瘤糖酵解過程中發(fā)揮重要作用，同時(shí)也能在HIF-1α的調(diào)節(jié)下介導(dǎo)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。本文旨在探討在尋常型銀屑病和人類永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞株中，HIF-1α、CD147及糖酵解相關(guān)蛋白可能發(fā)揮的作用及相互關(guān)系，為進(jìn)一步揭示銀屑病的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
　　方法:1、免疫組化法分析HIF-1α、CD147、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1(GlucoseTransporter1，GLUT1)、糖酵解關(guān)鍵酶己糖激酶(Hexok

3、inase2，HK2)、丙酮酸激酶(Pyruvatekinase2，PKM2)在尋常型銀屑病皮損區(qū)及正常人表皮中的表達(dá)及分布，并行相關(guān)性分析;
　　2、構(gòu)建小分子干擾片段RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)并在HaCaT細(xì)胞中干擾HIF-1α蛋白表達(dá)，WesternBlot檢測HIF-1α、CD147、GLUT1、HK2、PKM2蛋白表達(dá)的變化;
　　3、CoCl2誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞化學(xué)缺氧，West

4、ernBlot檢測HIF-1α、CD147、GLUT1、HK2、PKM2蛋白表達(dá)的變化;
　　4、免疫熒光共聚焦法檢測CD147和GLUT1蛋白在銀屑病皮損表皮中表達(dá)的共定位;
　　5、siRNA干擾/過表達(dá)HaCaT細(xì)胞中CD147蛋白，WesternBlot檢測CD147、GLUT1蛋白表達(dá)的變化;
　　6、siRNA干擾/過表達(dá)HaCaT細(xì)胞中GLUT1蛋白，WesternBlot檢測GLUT1、CD147蛋白表

5、達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1、HIF-1α、CD147、GLUT1、HK2、PKM2蛋白均在尋常型銀屑病皮損區(qū)較正常人表皮表達(dá)增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　2、尋常型銀屑病皮損中HIF-1α、CD147與GLUT1蛋白的表達(dá)兩兩存在正相關(guān)性(P＜0.05)，HK2、PKM2與其它指標(biāo)均無相關(guān)性（P＞0.05）;
　　3、HaCaT細(xì)胞中干擾HIF-1α表達(dá)后，HIF-1α、CD147、GLUT1及HK2蛋

6、白表達(dá)均顯著下降(P＜0.05)，PKM2表達(dá)無明顯差異(P＞0.05);
　　4、CoCl2誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞化學(xué)缺氧后，HIF-1α、CD147、GLUT1及HK2蛋白表達(dá)均顯著上升(P＜0.05)，PKM2的表達(dá)無明顯差異(P＞0.05);
　　5、CD147和GLUT1蛋白在尋常型銀屑病皮損區(qū)表達(dá)具有共定位現(xiàn)象，均分布在基底層細(xì)胞及棘層部分細(xì)胞的細(xì)胞膜上;
　　6、在HaCaT細(xì)胞中分別干擾和過表達(dá)CD147蛋