面突外胚間充質干細胞的多向分化及永生化.pdf

1、該實驗旨在探討人早期胚胎面突外胚間充質干細胞的多向分化潛能,并對該細胞永生化進行了初步研究,主要研究內容及結果如下:一、胚胎面突外胚間充質干細胞的培養(yǎng)及鑒定;50天流產自愿捐贈的胚胎,酶消化法培養(yǎng)面突外胚間充質干細胞,白血病抑制因子抑制分化.免疫細胞化學法染色顯示,細胞表達遷移中神經嵴細胞特異的HNK-1;Vimentin強陽性表達,顯示其間充質特性;Ⅷ因子弱表達;細胞不表達NF、GFAP、α-SMA、CK.結果表明,所獲得的細胞為未分

2、化的外胚間充質干細胞,為進一步研究其分化特性奠定了基礎.二、外胚間充質干細胞的自發(fā)分化; 自發(fā)分化包括體內及體外研究.將培養(yǎng)的未分化外胚間充質干細胞注入裸鼠皮下,1周時部分細胞出現壞死吸收,2周時無法找到注射的細胞,不排除細胞局部同化現象.在體外,去除白血病抑制因子后2天,外胚間充質干細胞出現明顯向平滑肌細胞分化的現象,約65﹪的細胞表達平滑肌細胞特異性標志α-SMA.2周,約有1﹪的細胞表達神經纖維細絲蛋白NF,零星細胞表達神經膠質纖

3、維酸性蛋白GFAP,同時細胞表達I型膠原.表明外胚間充質干細胞有分化能力,自發(fā)分化呈現向平滑肌細胞優(yōu)勢分化的傾向.三、外胚間充質干細胞向平滑肌細胞、成骨細胞的誘導分化;利用生長因子法誘導外胚間充質干細胞在體外分化.免疫細胞化學法圖象分析及半定量PCR顯示,TGF-β能有效促進EMSC向平滑肌細胞分化,平滑肌細胞比例由自發(fā)分化的65﹪增加到近95﹪.在含β-甘油磷酸鈉、維生素C、地塞米松的礦化液中,EMSC被誘導分化為成骨細胞,堿性磷酸酶

4、活性增強,I型膠原染色陽性,能形成礦化結節(jié),細胞表達成骨細胞特異的骨鈣素.四、外胚間充質干細胞向成牙本質樣細胞的誘導分化;在轉化生長因子β1和牙本質非膠原蛋白的作用下,細胞在膠原三維培養(yǎng)體系中呈現成牙本質細胞特異的形態(tài)改變,細胞出現極化,胞核位于一側,另一側有很長的突起,細胞平行排列;表達牙本質特異的涎磷蛋白(DSPP);在礦化液中,誘導細胞能形成礦化結節(jié);在體內,含細胞的膠原也出現礦化趨勢.表明EMSC已被成功誘導分化為終末期的成牙本