泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌包膜蛋白對(duì)致病性的影響.pdf

1、目的:探討ICU患者下呼吸道檢出不動(dòng)桿菌屬耐藥情況、不同致病狀態(tài)的檢出菌包膜蛋白產(chǎn)生情況及其與致病狀態(tài)的關(guān)系。我們共分離出10株定植菌株,32株感染菌株。通過分析其感染高危因素,探討定植菌與感染菌宿主在臨床方面差異。根據(jù)CPIS評(píng)分和定量培養(yǎng)的結(jié)果來判定細(xì)菌的定植與感染狀態(tài)。CPIS評(píng)分包括:體溫,外周血白細(xì)胞分類及計(jì)數(shù),氣道膿性分泌物的量,氧合指數(shù),胸部影像檢查結(jié)果和呼吸道抽吸物革蘭染色鏡檢及培養(yǎng)結(jié)果。當(dāng)CPIS評(píng)分大于6分,同時(shí)定量

2、培養(yǎng)結(jié)果大于菌落計(jì)數(shù)106CFU/ml診斷為呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎,即患者為感染狀態(tài)。并研究耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌在定植及感染狀態(tài)下外膜毒力蛋白(OmpA/BauA)的表達(dá)與其致病性的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1、菌株來源:收集2011-2012年來自河北省4家醫(yī)院的42株鮑曼不動(dòng)桿菌菌株。
　　 2、藥敏試驗(yàn):采用K-B法鑒定分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢哌酮、頭孢噻肟、哌拉西林、頭孢他啶、頭孢吡肟、比阿培

3、南、美羅培南、阿米卡星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、慶大霉素、氯霉素、氨曲南、米諾環(huán)素、復(fù)方新諾明16種抗菌素的敏感性。并根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)2008年版要求進(jìn)行抗菌藥物敏感性判斷。
　　 3、分析患者臨床高危因素:通過藥敏試驗(yàn)從中篩選出多重耐藥,泛耐藥及全耐藥的菌株,根據(jù)CPIS評(píng)分和患者分泌物定量培養(yǎng)的結(jié)果分離出定植菌株10株,感染菌株32株,并收集患者的臨床資料分析其兩組檢出菌宿主之間感染高危因素差別。<

4、br>　　 4、PCR擴(kuò)增外膜蛋白Ompa及BauA基因:根據(jù)GenBank公布的序列,設(shè)計(jì)Ompa(AY485227)及BauA(AY571146)基因的特異性引物。Ompa基因上游引物OMP1-5’ATTACGACGGAAATTGTAAGTAATTT-3’定位于Ompa基因+1—+26bp位堿基,下游引物OMP25’-CGACTCGTTAGAGTCGCTTTTTTATG-3’,定位于Ompa基因+1291—+1317bp位堿基,B

5、auA基因上游引物OMP15’-TGCAAGCCCAACCTCACT-3,定位于BauA基因+4060—+4078bp位堿基;下游引物OMP25’-TTCTCCAGACTTAGGGAT-3’,定位于BauA基因+6642—+6660bp位堿基進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將產(chǎn)物在0.8％瓊脂糖凝膠電泳。用凝膠成像系統(tǒng)攝像并保存。
　　 5、PCR產(chǎn)物序列分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、藥敏試驗(yàn)應(yīng)用K-B法檢測(cè)42株鮑曼不動(dòng)桿菌

6、均表現(xiàn)為多重耐藥,其中對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦耐藥率最低為30.95％,對(duì)頭孢噻肟的耐藥率95.23％。頭孢哌酮為88.10％,氨曲南及米諾環(huán)素分別為97.6％和78.57％;頭孢吡肟、頭孢他啶均為76.20％,慶大霉素、阿米卡星均為85.72％;哌拉西林與左氧氟沙星均為83.34％;復(fù)方新諾明為73.81％,對(duì)亞胺培南及比阿培南耐藥率分別為73.81％、92.86％,氯霉素的耐藥性69.05％,環(huán)丙沙星為90.48％。
　　 2、分

7、析患者臨床高危因素:通過復(fù)習(xí)病歷收集多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌定植或感染患者的臨床資料(年齡、性別、醫(yī)學(xué)合并癥、ICU住院時(shí)間、侵入性操作及其持續(xù)時(shí)間、預(yù)后等資料)、結(jié)合臨床干預(yù)效果42株菌株分為定植組10例、感染組32例。最常見的暴露因素為:入住ICU,機(jī)械通氣,其他侵入性操作。最常見的基礎(chǔ)疾病為:腦血管病,其次為慢性阻塞性肺疾病。對(duì)于定植組與感染組臨床收集的資料無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。感染組的死亡率大于定植組,但是兩組的死亡率差

8、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(15.66％vs10％,P＞0.05)。但是對(duì)于ICU患者的定植與感染組中,感染組患者ICU的住院時(shí)間明顯大于定植組(P＜0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、PCR法細(xì)菌包膜蛋白測(cè)定:BauA定植組(陽性率70％,陰性率30％),感染組(陽性率53.13％,陰性率46.87％)。通過卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其兩者的構(gòu)成比,P＞0.05,OmpA定植組(陽性率80％,陰性率20％),感染組(陽性率87.5％,陰性率1

9、2.5％)。通過卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其兩者的構(gòu)成比,P＞0.05,說明兩者之間包膜蛋白構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尚不能認(rèn)為定植組與感染組之間細(xì)菌的致病力與這兩種蛋白之間有關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1、本實(shí)驗(yàn)通過藥敏分析了河北省4家醫(yī)院收集的鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥情況。對(duì)頭孢哌酮\舒巴坦耐藥率最低為30.95％,對(duì)氨曲南的耐藥率最高,達(dá)到了97.60％,對(duì)碳青酶烯類耐藥率也在73.81％到92.86％之間。
　　 2、