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文檔簡介
1、骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)元樣細胞的誘導與帕金森病細胞模型的建立DirectlyInductionofBoneMesenchymalStemCellstoNeuron—likeCellsandPreparationofthecellmodelsofParkinson’SDisease本研究由國家自然科學基金項目(31172284)江蘇高校優(yōu)勢學科建設工程資助項目(PAPD)江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心項目資助研究生:李
2、麗華導師:邢華副教授揚州大學獸醫(yī)學院二零一四年六月?lián)P州大學碩士學位論文法純化BMSCs;BMSCs傳代消化,繪制細胞的生長曲線:流式細胞術檢測細胞表面特異因子;誘導劑誘導,對BMSCs進行向神經(jīng)元樣細胞分化的誘導,通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學變化,并以免疫細胞化學染色法檢測被誘導細胞神經(jīng)元特異性標志nestin、NSE和GFAP的表達,驗證BMSCs向神經(jīng)元樣細胞分化的潛能。以全骨髓貼壁法純化培養(yǎng)的BMSCs,貼壁生長良好,傳代后,BMS
3、Cs生長曲線為S形;流式細胞術檢測細胞表面特異因子陽性表達率很高,符合BMSCs表面抗原的特征;細胞免疫化學染色顯示誘導后細胞的nestin和NSE陽性,GFAP陰性,說明體外誘導的細胞表達神經(jīng)元特異性烯醇化酶和神經(jīng)干細胞的特異性標志物,不表達膠質(zhì)纖維酸性蛋白,提示在體外被誘導的細胞表達神經(jīng)元樣細胞的特異性標志物。體外分離純化的BMSCs,細胞表面標志符合BMSCs特征,提示貼壁培養(yǎng)法可以獲得高純度的BMSCs。在一定的條件下,BMSC
4、s在體外可以被誘導分化為神經(jīng)元樣細胞,說明BMSCs具有向神經(jīng)元樣細胞分化的潛能,提示BMSCs有替代神經(jīng)細胞移植治療帕金森病的可能。實驗二:帕金森病細胞模型的建立以PCI2細胞為對象,經(jīng)適當處理,建立可用作帕金森病相關研究的PD細胞模型。建立PCI2細胞穩(wěn)定的培養(yǎng)體系,繪制細胞生長曲線;不同濃度的MPP處理PCI2細胞,比較不同濃度的MPP對PCI2細胞活力的影響,選擇最適宜的MPP濃度;以細胞活力、細胞凋亡和特異性蛋白asynucl
5、ein為指標,檢測PD細胞模型的構建情況。以MTT法檢測細胞活力,以Hoechst33342熒光染色觀察細胞凋亡,通過AO和EB染色法檢測細胞凋亡率,免疫熒光染色法檢測特異性蛋白(Itsynuclein的存在。培養(yǎng)體系穩(wěn)定、操作簡單,細胞貼壁迅速,活力較高,細胞生長曲線呈S形。不同濃度的MPP對PCI2細胞的影響不同,隨著MPP濃度的增加,PCI2細胞活力降低,當MPP濃度高于5009M時,PCI2細胞活力不再顯著降低。Hoechst3
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