霍亂毒素B亞基乙肝表面抗原中蛋白融合基因在家蠶核型多角體病毒載體系統(tǒng)中的表達(dá)研究.pdf

1、現(xiàn)有的乙肝基因工程疫苗(含S抗原)接種后,約10%接種者為免疫無(wú)應(yīng)答者,而使用增加了PreS2抗原的中蛋白疫苗(含S和PreS2抗原)可減少免疫無(wú)應(yīng)答者的出現(xiàn).霍亂毒素B亞基(CTB)具有很強(qiáng)的免疫原性,能刺激機(jī)體產(chǎn)生粘膜IgA和血清IgG抗體.它在免疫佐劑、口服疫苗與多肽疫苗的研究中具有越來(lái)越重要的作用.為了獲得能夠口服吸收的并能引起免疫應(yīng)答的融合蛋白,該研究利用基因工程方法,將霍亂毒素B亞基乙肝中蛋白融合基因在家蠶桿狀病毒載體表達(dá)系

2、統(tǒng)中進(jìn)行了表達(dá).首先將霍亂毒素B亞基與乙肝中蛋白基因的重組到轉(zhuǎn)移載體pBacPAK8,獲得含有霍亂毒素B亞基與乙肝中蛋白融合基因的重組轉(zhuǎn)移載體pBacPAK-CTB-HBM,并與已線性化的病毒Bm-BacPAK6 DNA共轉(zhuǎn)染家蠶細(xì)胞,篩選出重組病毒BacPAK-CTB-HBM.將重組病毒BacPAK-CTB-HBM以10pfu/細(xì)胞感染家蠶家蠶培養(yǎng)細(xì)胞和幼蟲(chóng),Western印跡方法表明表達(dá)產(chǎn)物大小約為43kD.用ELISA法測(cè)定表達(dá)產(chǎn)

3、物的抗原性,結(jié)果顯示:家蠶培養(yǎng)細(xì)胞的胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)物具有明顯的抗原反應(yīng)性,重組病毒BacPAK-CTB-HBM感染的家蠶培養(yǎng)細(xì)胞第48 h的表達(dá)量最高,量約1.61ug/mL;BacPAK-CTB-HBM感染的家蠶蛹血淋巴也具有明顯的抗原反應(yīng)性,第120h的表達(dá)量最高,量約15.27ug/mL.將表達(dá)產(chǎn)物免疫動(dòng)物后,用ELISA法測(cè)定表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性,結(jié)果顯示:在口服初免方式中,連續(xù)攝入六周后,停止攝入后四周開(kāi)始檢測(cè)抗體.融合蛋白組有60