家蠶核型多角體病毒Bmorf60基因的功能分析.pdf

1、桿狀病毒已經(jīng)在世界上廣泛地應(yīng)用于生物殺蟲劑,并且作為載體在昆蟲細(xì)胞以及蟲體上表達(dá)了許多外源基因。目前,家蠶核型多角體病毒Bombyx morinucleopolyherovirus(BmNPV)已經(jīng)成功地在表面展示系統(tǒng)上得到了應(yīng)用。此外,桿狀病毒在基因治療上具有很大的潛在應(yīng)用價(jià)值。這些應(yīng)用使得桿狀病毒感染的分子機(jī)理具有重大的研究意義。BmNPV的全基因組序列的測(cè)定,為單個(gè)基因功能研究的廣泛開展提供了基礎(chǔ)。Bmorf60是桿狀病毒特有的基

2、因,但其功能還不清楚。本文中對(duì)Bmorf6D基因的功能開展了初步研究。
　　 1.序列搜索分析發(fā)現(xiàn),Bmorf60的同源基因存在于所有的groupⅠ和部分groupⅡ核型多角體病毒基因組中,但在雙翅目、膜翅目核型多角體病毒和顆粒體病毒基因組中不存在。groupⅠ病毒Autographa californica multiplenucleopolyhedrovirus(AcMNPV)orf74是Bmorf60的同源基因。該基因表達(dá)

3、的產(chǎn)物是包涵體源病毒(occlusion-derived virus,ODV)粒子的一個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白。groupⅡ病毒Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus(HaNPV)ory68是Bmorf60的另一個(gè)同源基因。但是,orf68表達(dá)的產(chǎn)物卻不是HaNPV ODV粒子的結(jié)構(gòu)蛋白。這些研究結(jié)果表明,Bmorf60在BmNPV生活周期中可能起著特殊的生物學(xué)功能。
　　 2.在含有BmNPV b

4、acmid的大腸桿菌E.coli中,得到了Bmorf60敲除的bacmid病毒。Bmorf60基因敲除的bacmid感染細(xì)胞后,與野生型bacmid相比,BV產(chǎn)量大幅下降,接著,將Bmorf60基因補(bǔ)回到相對(duì)應(yīng)的區(qū)域得到拯救bacmid,BV產(chǎn)量得到恢復(fù)。用vBm60-null,vBm-wt和vBm60-repair轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的熒光顯微觀察,結(jié)果顯示vBm60-null比vBm-wt和vBm60-repair在BmN細(xì)胞中