柞蠶核型多角體病毒lef-3基因、lef-1基因簇的研究及嗜酸性α-淀粉酶在家蠶中的表達(dá).pdf

1、本文采用隨機(jī)克隆法，建立柞蠶核型多角體病毒(Antheraeapernyinucleopolyhedrovirus，ApNPV)的質(zhì)?；蚪M文庫；通過對插入片段進(jìn)行克隆鑒定和序列分析，首次獲得ApNPV的晚期表達(dá)因子3(laterexpressionfactor3，lef-3)基因、蛻皮甾體尿苷二磷酸葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因(ecdysteroidUDP-glucosyltransferase，egt)、晚期表達(dá)因子1(lef-1)等基因，對

2、其進(jìn)行同源性比對分析。克隆得到了ApNPVPstⅠ和XhoⅠ兩個(gè)片段，其中一個(gè)片斷經(jīng)序列分析表明：該片段含有完整的lef-3基因，與其它來源的lef-3基因具有很高的同源性。ApNPVlef-3基因的閱讀框?yàn)?110個(gè)核苷酸，編碼369個(gè)氨基酸，編碼一種DNA單鏈結(jié)合蛋白(single-strandedDNA-bindingprotein，SSB)。在lef-3基因上游的互補(bǔ)序列有一編碼127個(gè)氨基酸序列的不完全的閱讀框。 第二

3、個(gè)片段總長度為3388bp，經(jīng)序列分析表明：該片段包括5個(gè)完整讀碼框，與苜蓿銀紋夜蛾多粒包埋核型多角體病毒(Autographacalifornicanucleopolyhedrovirus，AcNPV)ORF13/OpNPVORF12同源性較高的基因、晚期表達(dá)因子1(laterexpressionfactor1，lef-1)、缺失的EcdysteroidUDP-Glucosyltransferase基因(egt)、da26、da16。

4、其中egt基因編碼蛻皮甾體尿苷二磷酸葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶；lef-1編碼的是晚期表達(dá)因子1(LEF-1)，分析得到LEF-1的氨基酸序列有3個(gè)高度保守同源區(qū)，具有引發(fā)酶的活性；da26基因編碼結(jié)構(gòu)蛋白BV/ODV-E26，這個(gè)蛋白在出芽型病毒(buddedvirus，BV)和包埋型病毒(occlusion-derivedvirus，ODV)中都存在。 首次應(yīng)用家蠶-桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)嗜酸性α-淀粉酶，此酶基因長3906bp，編碼13