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1、該研究的目的是:用基因重組方式表達(dá)輪狀病毒中國(guó)地方株VP4,為嬰幼兒輪狀病毒感染性腹瀉的防治奠定基礎(chǔ).該研究第一部分工作是在昆早細(xì)胞中表達(dá)輪狀病毒P1A型中國(guó)地方株VP4.主要方法是利用DNA重組技術(shù),將A組輪狀病毒P1A型中國(guó)地方株全長(zhǎng)VP4基因的cDNA片段亞克隆到表達(dá)供體質(zhì)粒中,含VP4基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliDH10B<,AC>感受態(tài)細(xì)胞,篩選含VP4基因的重組Bacmid,轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞并表達(dá)重組VP4.第二部分工作是在
2、昆蟲(chóng)細(xì)胞中構(gòu)建針對(duì)中國(guó)流行型別的輪狀病毒樣顆粒.結(jié)構(gòu)蛋白VP2、VP4、VP6的桿狀病毒重組體共感染Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞(MOI=0.5),重組蛋白自行組裝成VLPs,氯化銫密度梯度離心純化表達(dá)產(chǎn)物,其蛋白定量分析的結(jié)果為172μg/3×10<'8>細(xì)胞.作者的研究表明:在桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)輪狀病毒中國(guó)地方株VP4并構(gòu)建VLPs(2/4/6)是切實(shí)可行的.這一結(jié)果為在中國(guó)制備重組輪狀病毒樣顆粒(2/4/6/7)奠定基因,可望應(yīng)用
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