酶聯(lián)免疫斑點法在輪狀病毒檢測及輪狀病毒中和試驗中的應用.pdf

1、輪狀病毒是引起小兒腹瀉的主因。全球每年有超過1.25億嬰幼兒腹瀉是由輪狀病毒引起的,并造成超過60萬嬰幼兒的死亡,且大部分死亡病例都發(fā)生在不發(fā)達的亞非國家。針對輪狀病毒的治療目前還沒有特別有效的治療藥物,因此預防輪狀病毒就顯得至關重要;而預防輪狀病毒最有效的方法就是研制輪狀病毒疫苗,因此研制安全、廣譜、高效的輪狀病毒疫苗就成為當今各國政府及世界衛(wèi)生組織(WHO)極為重要的任務。目前TCID50法是常用的檢測輪狀病毒感染力和輪狀病毒中和抗

2、體的方法,但由于TCID50法耗時長、主觀誤差大、工作量大等原因,限制其在大規(guī)模的篩選和試驗中應用。因此建立一種快速、高效、準確的輪狀病毒和輪狀病毒中和抗體的檢測方法對輪狀病毒的病毒學研究和輪狀病毒疫苗的開發(fā)都具有重要的作用和意義。
　　 本論文建立了輪狀病毒的分離,鑒定和擴大培養(yǎng)的方式,通過收集和分離培養(yǎng)不同的輪狀病毒為以后的輪狀病毒病毒學研究做準備。同時建立了一種新型的快速、高效輪狀病毒及輪狀病毒中和抗體的檢測法——酶聯(lián)免疫

3、斑點法,該方法是以酶聯(lián)免疫斑點法和ELISPOT自動化掃描儀為基礎,借助針對針對輪狀病毒結構蛋白VP6的特異性酶標抗體7H11和VP6的特異性反應,通過TMB顯色反應以區(qū)別感染和未感染細胞來實現(xiàn)檢測的;在本論文中還從可靠性,穩(wěn)定性等方面對建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點法進行驗證,通過對比發(fā)現(xiàn)新建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點法不僅具有快速、可靠、準確等特點,而且還和傳統(tǒng)的TCID50檢測法具有很好的相關性。新建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點法不僅可以用